灰葡萄孢角质酶的致病作用及角质酶突变菌株的基因分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-24页 |
| 一、真菌角质酶研究 | 第9-20页 |
| (一) 角质酶性质 | 第9-11页 |
| (二) 角质酶催化机理 | 第11-12页 |
| (三) 角质酶基因研究 | 第12-13页 |
| (四) 角质酶在病菌致病过程中的作用 | 第13-18页 |
| (五) 角质酶应用 | 第18-20页 |
| 二、灰葡萄孢及其角质酶 | 第20-23页 |
| (一) 灰葡萄孢病害及其危害性 | 第20页 |
| (二) 灰葡萄孢生物学特征 | 第20-21页 |
| (三) 灰葡萄孢的致病性 | 第21-22页 |
| (四) 灰葡萄孢角质酶的研究 | 第22-23页 |
| 三、本论文研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-37页 |
| 一、供试植株 | 第24页 |
| 二、试验菌株 | 第24页 |
| 三、培养基及培养液 | 第24-25页 |
| (一) 真菌培养基 | 第24页 |
| (二) 改良的查彼克——多克斯矿质培养基 | 第24页 |
| (三) 灰葡萄孢产酶培养液及产毒素培养液 | 第24-25页 |
| (四) LB培养基 | 第25页 |
| 四、试剂和仪器 | 第25-27页 |
| (一) 主要试剂 | 第25-27页 |
| (二) 主要仪器 | 第27页 |
| 五、角质酶突变体诱变与筛选 | 第27-28页 |
| (一) 诱变方法 | 第27页 |
| (二) 筛选方法 | 第27-28页 |
| 六、突变体致病因子测定 | 第28-31页 |
| (一) 角质酶测定 | 第28-29页 |
| (二) 胞壁降解酶测定 | 第29-31页 |
| (三) 毒素测定 | 第31页 |
| 七、灰葡萄孢基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| (一) DNA提取 | 第32页 |
| (二) DNA纯度和浓度测定 | 第32页 |
| 八、角质酶基因克隆 | 第32-34页 |
| (一) 引物设计 | 第32页 |
| (二) PCR扩增 | 第32-33页 |
| (三) PCR产物纯化 | 第33页 |
| (四) 重组质粒构建 | 第33-34页 |
| (五) 重组质粒DNA提取 | 第34页 |
| 九、灰葡萄孢角质酶基因的表达 | 第34-35页 |
| (一) 灰葡萄孢RNA的提取 | 第34页 |
| (二) 反转录 | 第34-35页 |
| (三) 实时荧光定量PCR检测 | 第35页 |
| 十、病菌致病力测定方法 | 第35-37页 |
| (一) 接种方法 | 第36页 |
| (二) 严重度分级标准 | 第36-37页 |
| 结果与分析 | 第37-54页 |
| 一、角质酶突变菌株筛选 | 第37页 |
| 二、突变菌株角质酶活性 | 第37-40页 |
| (一) 分生孢子产生的角质酶 | 第37-38页 |
| (二) 菌丝产生的角质酶 | 第38-39页 |
| (三) 产酶性状的稳定性 | 第39-40页 |
| 三、突变菌株生物学特性 | 第40-41页 |
| (一) 菌丝生长及菌落特征 | 第40-41页 |
| (二) 胞壁降解酶与毒素活性 | 第41页 |
| 四、突变菌株的致病作用 | 第41-44页 |
| 五、角质酶基因克隆和序列分析 | 第44-48页 |
| (一) 基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| (二) 角质酶基因克隆 | 第45-46页 |
| (三) 角质酶基因序列比对 | 第46-48页 |
| 六、突变菌株角质酶基因的表达量 | 第48-54页 |
| (一) 灰葡萄孢RNA提取 | 第48-49页 |
| (二) 实时荧光定量PCR检测 | 第49-54页 |
| 讨论 | 第54-57页 |
| 一、角质酶的致病作用 | 第54页 |
| 二、角质酶基因 | 第54-56页 |
| 三、实时荧光定量PCR | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
