| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| ·金属硫蛋白概述 | 第17-20页 |
| ·金属硫蛋白的基本特征及分类 | 第17-18页 |
| ·经典金属硫蛋白的结构与表达调控 | 第18-20页 |
| ·金属硫蛋白的生物学功能 | 第20-22页 |
| ·参与体内微量元素代谢及拮抗重金属的毒性 | 第20页 |
| ·清除自由基 | 第20-21页 |
| ·参与各种胁迫反应 | 第21页 |
| ·金属硫蛋白和疾病的相关性 | 第21-22页 |
| ·四膜虫金属硫蛋白研究进展 | 第22-31页 |
| ·四膜虫金属硫蛋白概述 | 第22-25页 |
| ·四膜虫金属硫蛋白的进化 | 第25-27页 |
| ·MTs基因的表达调控 | 第27-30页 |
| ·MTs的应用 | 第30-31页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第31-34页 |
| 第二章 嗜热四膜虫金属硫蛋白的分析及MTT1和MTT2的克隆 | 第34-48页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌株及质粒 | 第34页 |
| ·试剂及酶 | 第34-35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·四膜虫细胞培养 | 第35-36页 |
| ·四膜虫基因组的提取 | 第36页 |
| ·MTT1和MTT2基因的克隆 | 第36-40页 |
| ·结果 | 第40-46页 |
| ·MTs中Cys的分布特点 | 第40-41页 |
| ·四膜虫MTs在染色体上的位置 | 第41-42页 |
| ·嗜热四膜虫MTs不同时期的表达 | 第42-43页 |
| ·MTs中半胱氨酸排布特点分析 | 第43-44页 |
| ·MTT1和MTT2基因的克隆 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 四膜虫金属硫蛋白MTT1和MTT2在不同胁迫条件下的表达分析 | 第48-67页 |
| ·材料与仪器 | 第48-49页 |
| ·细胞株 | 第48页 |
| ·试剂及工具酶 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·四膜虫细胞培养 | 第49页 |
| ·SO_2衍生物和NaCl对四膜虫繁殖的影响 | 第49页 |
| ·La~(3+)对四膜虫繁殖的影响 | 第49页 |
| ·La~(3+)进入嗜热四膜虫细胞实验 | 第49页 |
| ·胁迫条件对四膜虫的处理 | 第49-50页 |
| ·总RNA的提取 | 第50-51页 |
| ·cDNA合成 | 第51页 |
| ·Real time PCR引物设计 | 第51-52页 |
| ·基因表达分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-64页 |
| ·NaCl对嗜热四膜虫繁殖速度的影响 | 第52-53页 |
| ·SO_2衍生物对嗜热四膜虫繁殖速度的影响 | 第53-54页 |
| ·La~(3+)对嗜热四膜虫繁殖的影响 | 第54页 |
| ·La~(3+)能够进入四膜虫细胞 | 第54-56页 |
| ·对数生长期金属硫蛋白MTT1和MTT2的表达 | 第56-59页 |
| ·Cd~(2+)和Cu~(2+)对金属硫蛋白MTT1和MTT2表达的影响 | 第59-60页 |
| ·NaCl对金属硫蛋白MTT1和MTT2表达的影响 | 第60-61页 |
| ·短期饥饿对嗜热四膜虫MTT1和MTT2表达影响 | 第61-62页 |
| ·SO_2衍生物对MTT1和MTT2表达的影响 | 第62-63页 |
| ·La~(3+)对嗜热四膜虫MTT1和MTT2的影响 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 四膜虫金属硫蛋白MTT1和MTT2的功能比较 | 第67-89页 |
| ·材料 | 第67-69页 |
| ·菌株及质粒 | 第67页 |
| ·试剂及酶 | 第67-68页 |
| ·主要试剂配制 | 第68-69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-75页 |
| ·pET28a-MTT1和pET28a-MTT2表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| ·重组表达质粒pET28a-MTT1和pET28a-MTT2的鉴定 | 第70页 |
| ·MTT1和MTT2的表达 | 第70-71页 |
| ·MTT1和MTT2的纯化 | 第71-73页 |
| ·MTT1和MTT2的荧光光谱分析 | 第73页 |
| ·Cd_(16)-MTT1和Cd_(11)-MTT2的圆二色谱(CD)光谱分析 | 第73-74页 |
| ·Cd_(16)-MTT1和Cd_(11)-MTT2抗氧化能力分析 | 第74页 |
| ·MTT1和MTT2与ⅡB金属离子稳定常数测定 | 第74页 |
| ·Cd_(16)-MTT1和Cd_(11)-MTT2与Cu~(2+)的反应 | 第74-75页 |
| ·MTT1和MTT2蛋白与La~(3+)作用的荧光分析 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-87页 |
| ·pET28a-MTT1和pET28a-MTT2表达质粒的构建 | 第75页 |
| ·MTT1和MTT2基因的诱导表达纯化 | 第75-77页 |
| ·MTT1和MTT2蛋白的纯化 | 第77-79页 |
| ·MTT1和MTT2结合Cd~(2+)的数目 | 第79-80页 |
| ·Cd_(16)-MTT1和Cd_(11)-MTT2的二级结构分析 | 第80-81页 |
| ·Cd_(16)-MTT1 and Cd_(11)-MTT2的抗氧化能力 | 第81-82页 |
| ·MTT1和MTT2结合Cd~(2+),Hg~(2+)和Zn~(2+)的稳定常数 | 第82-84页 |
| ·Cd_(16)-MTT1和Cd_(11)-MTT2与Cu~(2+)反应的动态分析 | 第84-86页 |
| ·La~(3+)与MTT1和MTT2相互作用研究 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 MTT1和MTT2基因敲除细胞株的构建和鉴定 | 第89-101页 |
| ·材料与仪器 | 第89-90页 |
| ·细胞株、菌株和质粒 | 第89页 |
| ·试剂及工具酶 | 第89页 |
| ·主要仪器 | 第89页 |
| ·主要试剂的配制 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-94页 |
| ·MTT1和MTT3基因侧翼序列的克隆 | 第90-91页 |
| ·MTT1和MTT3基因敲除载体的构建 | 第91-92页 |
| ·MTT2和MTT4敲除载体的构建 | 第92页 |
| ·△MTT1-MTT3和△MTT2-MTT4嗜热四膜虫敲除株的构建 | 第92-94页 |
| ·Cd~(2+)与Cu~(2+)对四膜虫敲除株繁殖的影响 | 第94页 |
| ·结果 | 第94-99页 |
| ·MTT1和MTT3及MTT2和MTT4侧翼序列的克隆 | 第94-95页 |
| ·敲除载体pNEO4-MTT1-MTT3和pNEO4-MTT2-MTT4的构建 | 第95-96页 |
| ·△MTT1-MTT3和△MTT2-MTT4细胞株的鉴定 | 第96-98页 |
| ·不同条件下三种细胞株繁殖的比较 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| 总结 | 第101-103页 |
| 展望 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-121页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 个人简况及联系方式 | 第123-125页 |
