| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-26页 |
| ·新型分子佐剂 C3d 的研究进展 | 第15-22页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·C3d 的产生及性质 | 第15-16页 |
| ·C3d 的受体CR2 | 第16-17页 |
| ·C3d 的佐剂作用 | 第17-19页 |
| ·C3d 对于免疫的增强作用 | 第17-19页 |
| ·P28 的免疫增强作用 | 第19页 |
| ·C3d 作为分子佐剂的作用机制 | 第19-21页 |
| ·其他物种C3d 的研究 | 第21页 |
| ·结语 | 第21-22页 |
| ·包虫病疫苗研究进展 | 第22-26页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·病原学与流行病学 | 第22-23页 |
| ·疫苗预防的必要性 | 第23页 |
| ·疫苗的研究 | 第23-25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| 第二章 包虫病基因工程亚单位疫苗的改造及串联表达 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·重组质粒的构建策略 | 第29-30页 |
| ·引物的设计及基因的扩增 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收及限制性酶切、载体单酶切及去磷酸化 | 第30-31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·质粒的小量提取（碱裂解法） | 第31页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定、测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·多拷贝串联 EG95s 重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·重组质粒的表达 | 第32页 |
| ·表达产物的检测及鉴定（SDS-PAGE 及转印） | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·EG95s 基因的 PCR 扩增 | 第33页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第33页 |
| ·EG95s 序列测定结果 | 第33-34页 |
| ·含多拷贝串联 EG95s 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·含多拷贝串联 EG95s 重组质粒的测序鉴定 | 第34页 |
| ·pGEX-6p-1-EG95s、pGEX-6p-1-2EG95s、pGEX-6p-1-3EG95s 质粒的原核表达 | 第34-35页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第35-36页 |
| ·改造后重组蛋白 EG95s 的可溶性分析 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白串联表达量分析 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 羊补体分子 C3d 基因的克隆与序列分析 | 第38-49页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·羊肝脏 | 第38页 |
| ·载体和菌株 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·实验用试剂及配制 | 第38-39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-40页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·羊肝脏总 RNA 的提取 | 第39页 |
| ·两步法 RT-PCR 扩增羊 C3d 基因 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的制备及鉴定 | 第40页 |
| ·基因序列测定及分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·羊肝组织总RNA | 第40-41页 |
| ·基因的扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第41页 |
| ·C3d 的序列测定与分析 | 第41-45页 |
| ·讨论 | 第45-49页 |
| 第四章 3拷贝串联羊补体分子C3d与EG95s基因的融合表达及 重组蛋白的纯化 | 第49-63页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·载体和菌株 | 第49页 |
| ·酶标抗体和阳性血清 | 第49-50页 |
| ·实验主要试剂和试剂盒 | 第50页 |
| ·实验用溶液及其配制 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-55页 |
| ·构建策略 | 第51-52页 |
| ·表达盒特性 | 第52页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·基因扩增 | 第52页 |
| ·重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·抗原基因Eg95s的引入 | 第53页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第53页 |
| ·重组质粒表达融合蛋白 | 第53-54页 |
| ·表达产物的检测及重组蛋白的鉴定 | 第54页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-61页 |
| ·引入 Linker 链的 C3d 基因、EG95s 基因的扩增 | 第55页 |
| ·含 1、2、3 拷贝 C3d 重组质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| ·含 EG95s 基因重组质粒的构建 | 第56页 |
| ·亚克隆实验 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的表达 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·三拷贝羊 C3d 的串联 | 第61页 |
| ·重组质粒的表达 | 第61页 |
| ·包涵体蛋白的纯化与复性 | 第61-63页 |
| 第五章 全文结论 | 第63-64页 |
| ·羊包虫病基因工程疫苗的改造及串联表达 | 第63页 |
| ·羊补体分子 C3d 基因的克隆 | 第63页 |
| ·三拷贝羊 C3d 与 EG95s 基因的融合表达 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
