| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·水稻纹枯病概况 | 第10-13页 |
| ·水稻纹枯病简介 | 第10页 |
| ·水稻纹枯病的危害 | 第10-11页 |
| ·纹枯菌侵染水稻的过程 | 第11页 |
| ·纹枯菌侵染水稻的特点 | 第11-12页 |
| ·纹枯菌的致病机理 | 第12-13页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统简介 | 第13-19页 |
| ·丝状真菌原生质体的制备 | 第14-15页 |
| ·针对丝状真菌原生质体的转化方法 | 第15-16页 |
| ·PEG介导转化法 | 第15页 |
| ·电击转化法 | 第15-16页 |
| ·限制性内切酶介导转化法 | 第16页 |
| ·针对丝状真菌完整细胞的转化方法 | 第16-17页 |
| ·醋酸锂转化法 | 第16页 |
| ·基因枪转化法 | 第16-17页 |
| ·根癌农杆菌介导转化法 | 第17页 |
| ·用于丝状真菌原生质体转化系统的载体 | 第17-18页 |
| ·用于丝状真菌遗传转化系统的选择标记 | 第18-19页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第18页 |
| ·药物抗性标记 | 第18-19页 |
| ·功能标记 | 第19页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)简介 | 第19-20页 |
| ·绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP) | 第19页 |
| ·组蛋白增强型绿色荧光蛋白(Histon enhanced green fluorescent protein) | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·所用纹枯菌(Rhizoctorzia solani)和稻瘟菌(Magnaporthe grisea) | 第21页 |
| ·载体 | 第21页 |
| ·大肠杆菌菌种 | 第21页 |
| ·主要试剂、酶类和试剂盒 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-34页 |
| ·稻瘟菌(Magnaporthe grisea)原生质体转化 | 第22-23页 |
| ·稻瘟菌原生质体的制备 | 第22-23页 |
| ·稻瘟菌原生质体转化 | 第23页 |
| ·水稻纹枯菌(Rhizoctorzia solani)原生质体转化 | 第23-25页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的制备 | 第24页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的再生 | 第24页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的转化 | 第24-25页 |
| ·水稻纹枯菌基因组DNA的大量提取 | 第25页 |
| ·纹枯菌转化子的培养及其DNA的小量制备 | 第25-26页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第26-27页 |
| ·转化子的测序验证 | 第27-30页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收目的片段 | 第27页 |
| ·目的片段的克隆 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的小量制备与纯化 | 第28-29页 |
| ·测序反应 | 第29-30页 |
| ·稻瘟菌和纹枯菌中Histon的克隆 | 第30-31页 |
| ·Histone-enhanced green fluorescent protein(eGFP)载体的构建 | 第31-33页 |
| ·载体中Histone组件的克隆 | 第31-32页 |
| ·PCR产物纯化 | 第32页 |
| ·在纯化后的PCR产物上加A尾 | 第32-33页 |
| ·载体构建 | 第33页 |
| ·GFP和eGFP短暂表达及观察 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-49页 |
| ·水稻纹枯菌(Rhizoctonia solani)原生质体的制备 | 第34-37页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的分离 | 第34-35页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的收集 | 第35-36页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的再生 | 第36页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体的保存 | 第36-37页 |
| ·水稻纹枯菌原生质体遗传转化体系的建立 | 第37-41页 |
| ·固体培养基中用于转化子筛选的潮霉素(hygromycin)浓度的确定 | 第37-39页 |
| ·液体培养基中用于转化子筛选的潮霉素(hygromycin)浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第40页 |
| ·转化子的测序验证 | 第40-41页 |
| ·水稻纹枯菌中的histon H3(组蛋白H3)基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·稻瘟菌和水稻纹枯菌eGFP载体的构建 | 第42-47页 |
| ·T载体的构建 | 第43页 |
| ·稻瘟菌和水稻纹枯菌H3-GFP和GFP-H3融和蛋白表达中间载体的构建 | 第43-44页 |
| ·稻瘟菌和水稻纹枯菌GFP-H3载体的构建 | 第44-47页 |
| ·GFP载体的构建 | 第47页 |
| ·水稻纹枯菌和稻瘟菌中的GFP和GFP-H3载体的短暂表达及观察 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·水稻纹枯菌(Rhizoctonia solani)原生质体的制备 | 第49-50页 |
| ·水稻纹枯菌(Rhizoctonia solani)原生质体遗传转化 | 第50页 |
| ·T载体的构建 | 第50-52页 |
| 5 参考文献 | 第52-55页 |
| 6 附录:所用培养基和试剂配方 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
