| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 一、结肠直肠癌的临床表现与分期 | 第16页 |
| 二、结肠直肠癌的早期诊断现状 | 第16-18页 |
| 三、PA28γ和NNMT与结肠直肠癌 | 第18-20页 |
| 第一部分 PA28 γ和NNMT表达质粒的构建及鉴定材料和方法 | 第20-34页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| ·质粒与菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·细菌培养基 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-25页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·RNA提取 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR反应 | 第22-23页 |
| ·重组质粒PMD18-T-PA28 γ和PMD18-T-NNMT的构建与鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-PA28 γ和pGEX-4T-1-NNMT的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-31页 |
| ·RT-PCR结果 | 第25-26页 |
| ·pMD18-T/PA28 γ和pMD18-T/NNMT重组质粒的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| ·pGEX-4T-1/PA28 γ和pGEX-4T-1/NNMT重组质粒的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·测序鉴定 | 第28-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 5 小结 | 第33-34页 |
| 第二部分 重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第34-48页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-38页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·融合蛋白的大量诱导表达 | 第36页 |
| ·融合蛋白的优化表达 | 第36页 |
| ·表达产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·表达产物western-blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-44页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1/PA28 γ的表达 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1/NNMT的表达 | 第39-41页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·表达产物鉴定 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 第三部分 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第48-62页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·细胞与动物 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂配制 | 第48-50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·抗原制备 | 第50页 |
| ·动物免疫 | 第50页 |
| ·效价测定 | 第50-51页 |
| ·细胞融合 | 第51页 |
| ·阳性克隆的筛选、克隆化和诱生腹水 | 第51-52页 |
| ·抗体的Western-blot鉴定 | 第52-53页 |
| ·McAb细胞上清效价测定 | 第53页 |
| ·McAb的亚类测定 | 第53页 |
| ·McAb的纯化 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光对PA28 γ蛋白在真核细胞中的定位 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-60页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第54-55页 |
| ·抗体的Western-blot鉴定 | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体培养上清的效价 | 第56-57页 |
| ·单克隆抗体的亚类测定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体的纯化结果 | 第58-59页 |
| ·免疫荧光亚细胞定位结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录:缩略词 | 第67-68页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
