甜菜硝酸还原酶基因克隆及生物信息学分析
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第13页 |
| ·硝酸还原酶的研究现状 | 第13-17页 |
| ·硝酸还原酶的分布和类型 | 第14页 |
| ·硝酸还原酶的结构与功能 | 第14-15页 |
| ·硝酸还原酶活性的调节 | 第15-17页 |
| ·植物中已克隆的硝酸还原酶基因 | 第17页 |
| ·基因克隆的方法 | 第17-21页 |
| ·基因克隆方法的选择原则 | 第17-18页 |
| ·基因克隆的方法 | 第18-21页 |
| ·本研究课题的来源及主要研究内容 | 第21-22页 |
| ·本研究课题的来源 | 第21页 |
| ·本研究的主要内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-51页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·供试品种 | 第22页 |
| ·试验所涉及的菌株和质粒 | 第22页 |
| ·试验所涉及的酶，试剂盒及生化试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·甜菜硝酸还原酶cDNA 的克隆 | 第23-40页 |
| ·NR cDNA 克隆的技术路线 | 第23-24页 |
| ·试验材料甜菜的用前准备 | 第24页 |
| ·硝酸还原酶活力的测定 | 第24-25页 |
| ·甜菜叶片总RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·反转录合成cDNA 的第一链 | 第26页 |
| ·P1 的克隆 | 第26-28页 |
| ·cDNA 5′端的克隆 | 第28-33页 |
| ·P2 的克隆 | 第33-34页 |
| ·cDNA 3′端的克隆 | 第34-37页 |
| ·P3 的克隆 | 第37-38页 |
| ·cDNA 全长的克隆 | 第38-40页 |
| ·甜菜硝酸还原酶基因组DNA（gDNA）的克隆 | 第40-45页 |
| ·试验材料甜菜的用前准备 | 第40页 |
| ·CTAB 法提取gDNA | 第40页 |
| ·gDNA 的完整性分析 | 第40-41页 |
| ·gDNA5′端的克隆 | 第41页 |
| ·gDNA MS 的克隆 | 第41-43页 |
| ·gDNA3′端的克隆 | 第43页 |
| ·gDNA 全长的克隆 | 第43-45页 |
| ·甜菜硝酸还原酶基因的Southern 杂交分析 | 第45-48页 |
| ·探针的标记 | 第45-46页 |
| ·SDS 法提取高纯度的甜菜基因组DNA | 第46页 |
| ·基因组DNA 的酶切 | 第46-47页 |
| ·凝胶的变性 | 第47页 |
| ·转膜 | 第47页 |
| ·DNA 的固定 | 第47页 |
| ·预杂交与杂交 | 第47-48页 |
| ·洗膜 | 第48页 |
| ·免疫检测 | 第48页 |
| ·甜菜硝酸还原酶的生物信息学分析 | 第48-51页 |
| ·生物信息学软件和网络服务器 | 第49页 |
| ·甜菜NR 基因编码蛋白的结构分析 | 第49-50页 |
| ·甜菜NR 基因编码蛋白的功能分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-73页 |
| ·甜菜硝酸还原酶cDNA 的克隆 | 第51-59页 |
| ·不同诱导时间甜菜叶片NR 活力的测定 | 第51页 |
| ·甜菜总RNA 的提取及检测 | 第51-52页 |
| ·P1 的克隆 | 第52-53页 |
| ·cDNA 5′端的克隆 | 第53-55页 |
| ·P2 的克隆 | 第55-56页 |
| ·cDNA 3′端的克隆 | 第56-57页 |
| ·P3 的克隆 | 第57-58页 |
| ·cDNA 全长的克隆 | 第58-59页 |
| ·甜菜硝酸还原酶基因组DNA（gDNA）的克隆 | 第59-62页 |
| ·甜菜gDNA 的提取及检测 | 第59-60页 |
| ·gDNA 5′端的克隆 | 第60页 |
| ·gDNA MS 的克隆 | 第60-61页 |
| ·gDNA 3′端的克隆 | 第61页 |
| ·gDNA 全长的克隆 | 第61-62页 |
| ·甜菜硝酸还原酶基因的Southern 杂交分析 | 第62-64页 |
| ·探针的标记 | 第62-63页 |
| ·SDS 法提取的甜菜基因组DNA | 第63页 |
| ·杂交免疫检测 | 第63-64页 |
| ·甜菜硝酸还原酶的生物信息学分析 | 第64-73页 |
| ·甜菜NR 基因编码蛋白的结构分析 | 第64-71页 |
| ·甜菜NR 基因编码蛋白的功能分析 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| ·试验选材 | 第73页 |
| ·甜菜的诱导处理及RNA 提取 | 第73-74页 |
| ·RACE 法克隆目的基因 | 第74页 |
| ·Southern 杂交检测基因的拷贝数 | 第74-75页 |
| ·甜菜NR 的生物信息学分析 | 第75页 |
| ·甜菜NR 核苷酸序列的测序结果分析 | 第75-76页 |
| 5 结论 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附录 | 第85-97页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第97页 |
