| 英文缩略表 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| ·茶氨酸 | 第13-16页 |
| ·茶氨酸研究的历史与现状 | 第13-14页 |
| ·茶氨酸的制备 | 第14-16页 |
| ·茶氨酸分析测定及提取纯化 | 第16页 |
| ·茶氨酸的发展前景 | 第16页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶 | 第16-18页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶的分布 | 第16-17页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶的制备 | 第17页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶的催化反应 | 第17页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶活性的测定 | 第17-18页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶的应用及发展前景 | 第18页 |
| ·谷氨酰胺合成酶 | 第18-20页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的分布 | 第18-19页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的催化反应 | 第19页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的应用价值 | 第19-20页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第20-23页 |
| ·实验目的 | 第20页 |
| ·实验主要内容 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-23页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶基因的克隆与表达 | 第20-21页 |
| ·谷氨酰胺合成酶基因的克隆与表达 | 第21-22页 |
| ·工程菌pET-GS催化合成茶氨酸反应条件的优化 | 第22-23页 |
| 第三章 大肠杆菌DH5A中的谷氨酰转肽酶基因的克隆 | 第23-36页 |
| ·材料与方法 | 第23-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·以菌液为模板进行PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收 | 第27页 |
| ·目的片段和载体双酶切并进行产物回收及纯化 | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·DH5a感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第29页 |
| ·碱法小批量抽提质粒DNA[46] | 第29-30页 |
| ·核酸电泳 | 第30页 |
| ·重组质粒pUG-GGT的双酶切验证 | 第30页 |
| ·基因序列测定 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-35页 |
| ·谷氨酰转肽酶基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pUC19-GGT的构建 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pUC19-GGT双酶切验证 | 第32页 |
| ·序列测定 | 第32-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第四章 Γ-谷氨酰转肽酶的诱导表达研究 | 第36-43页 |
| ·材料和试剂 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·工程菌生长曲线制作方法 | 第36-37页 |
| ·不同诱导温度优化 | 第37页 |
| ·不同养菌温度优化 | 第37页 |
| ·不同诱导剂浓度优化 | 第37-38页 |
| ·酶活检测 | 第38页 |
| ·茶氨酸合成测定 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·工程菌生长曲线的制作 | 第38-39页 |
| ·诱导温度优化结果 | 第39页 |
| ·养菌温度优化结果 | 第39-40页 |
| ·诱导剂浓度优化结果 | 第40页 |
| ·酶活测定 | 第40页 |
| ·茶氨酸合成测定 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第五章 荧光假单胞菌中的谷氨酰胺合成酶基因的克隆 | 第43-53页 |
| ·材料与方法 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·溶菌酶法抽提基因组 | 第43-44页 |
| ·引物的设计与合成 | 第44页 |
| ·以菌液为摸板进行PCR扩增及产物回收 | 第44-45页 |
| ·目的片断和载体双酶切 | 第45页 |
| ·连接反应 | 第45-46页 |
| ·BL21感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第46页 |
| ·重组质粒pET-GS的双酶切验证 | 第46页 |
| ·重组质粒pET-GS的PCR验证 | 第46-47页 |
| ·基因序列测定 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·荧光假单胞菌基因组的抽提 | 第47页 |
| ·谷氨酰胺合成酶基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pET-GS的构建 | 第48页 |
| ·重组质粒pET-GS的双酶切验证 | 第48-49页 |
| ·基因序列测定 | 第49-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第六章 谷氨酰胺合成酶的诱导表达研究 | 第53-60页 |
| ·材料和试剂 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·工程菌生长曲线制作方法 | 第54页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| ·GS试剂盒测定GS转移酶活性 | 第54-55页 |
| ·不同诱导剂浓度优化 | 第55页 |
| ·不同养菌温度优化 | 第55页 |
| ·不同诱导温度优化 | 第55页 |
| ·酶活性检测 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-59页 |
| ·工程菌生长曲线制作 | 第56页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析结果 | 第56-57页 |
| ·不同诱导剂浓度优化结果 | 第57-58页 |
| ·不同养菌温度优化实验结果 | 第58页 |
| ·不同诱导温度优化实验结果 | 第58-59页 |
| ·酶活性检测 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第七章 工程菌催化合成茶氨酸反应条件的优化 | 第60-66页 |
| ·材料和试剂 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·茶氨酸合成测定 | 第60页 |
| ·pH对茶氨酸合成的影响 | 第60页 |
| ·ATP浓度对茶氨酸合成的影响 | 第60-61页 |
| ·缓冲液对茶氨酸合成的影响 | 第61页 |
| ·底物浓度对茶氨酸合成的影响 | 第61页 |
| ·反应时间对茶氨酸合成的影响 | 第61页 |
| ·对照实验 | 第61页 |
| ·实验结果 | 第61-65页 |
| ·pH对茶氨酸合成的影响 | 第61-62页 |
| ·ATP浓度对合成茶氨酸的影响 | 第62页 |
| ·咪唑作为缓冲液的确定 | 第62-63页 |
| ·底物浓度对合成茶氨酸的影响 | 第63-64页 |
| ·反应时间对合成茶氨酸的影响 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第八章 讨论与总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第73页 |