| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 文献综述 染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用 | 第10-23页 |
| 1. 基因治疗与基因免疫 | 第10-11页 |
| ·基因治疗 | 第10页 |
| ·基因免疫 | 第10-11页 |
| 2. 重组载体的设计要求 | 第11-13页 |
| ·与宿主基因组整合及诱发突变的危险性 | 第11页 |
| ·诱发自身免疫或免疫耐受的危险性 | 第11-12页 |
| ·水平传播及对环境的危害性 | 第12页 |
| ·在动物产品中的残留及其对人体的危害性 | 第12-13页 |
| 3. 染色体—质粒平衡致死系统 | 第13-20页 |
| ·基本原理 | 第13页 |
| ·常用的营养缺陷标志基因 | 第13-15页 |
| ·asd 基因 | 第13-14页 |
| ·thyA 基因 | 第14页 |
| ·glnA 基因 | 第14-15页 |
| ·染色体一质粒平衡致死系统的构建 | 第15-18页 |
| ·缺陷型菌株的构建 | 第15-17页 |
| ·互补质粒的构建 | 第17-18页 |
| ·染色体一质粒平衡致死系统的应用 | 第18-20页 |
| ·在减毒疫苗中的应用 | 第18-19页 |
| ·在基因疫苗中的应用 | 第19-20页 |
| 4. 问题与展望 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 研究内容一 THYA~-大肠杆菌突变株的筛选与鉴定 | 第23-38页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·引物的设计 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·ThyA~-大肠杆菌的选育 | 第25页 |
| ·突变株生长特性试验 | 第25页 |
| ·突变株稳定性试验 | 第25页 |
| ·ThyA 基因序列分析 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌ThyA 基因表达载体的构建 | 第26页 |
| ·重组ThyA 的表达 | 第26-27页 |
| ·ThyA 抗体的制备与鉴定 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌突变株ThyA 基因表达分析 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-35页 |
| ·ThyA~-大肠杆菌的选育 | 第28页 |
| ·突变株生长特性 | 第28-29页 |
| ·突变株的稳定性 | 第29页 |
| ·突变基因的序列分析 | 第29-32页 |
| ·重组THYA 的表达 | 第32-33页 |
| ·THYA 抗体的制备与鉴定 | 第33-35页 |
| ·突变株THYA 基因表达分析 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 研究内容二 以THYA 基因为非抗性选择标记真核表达载体的构建 | 第38-47页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·质粒与菌株 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·试验动物 | 第39页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第39页 |
| ·DNA 模板的制备 | 第39页 |
| ·THYA 基因的PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·PCR 产物回收 | 第40页 |
| ·PDTALYZ 的构建 | 第40页 |
| ·重组质粒的转化 | 第40页 |
| ·发酵过程中重组菌的遗传稳定性 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-44页 |
| ·PCR 扩增产物电泳结果 | 第41-42页 |
| ·PDTALYZ 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·PDTALYZ 与 THYA-大肠杆菌转化 | 第43页 |
| ·转化效率的比较 | 第43页 |
| ·发酵过程中的遗传稳定性 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |