酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的敲除
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| ·课题背景 | 第11-14页 |
| ·国内外燃料乙醇的发展状况 | 第11-14页 |
| ·发酵产乙醇微生物的选育 | 第14页 |
| ·酿酒酵母的基因功能研究 | 第14-20页 |
| ·基因敲除技术 | 第15-20页 |
| ·基因敲除序列组件的构建 | 第16-19页 |
| ·多基因敲除与标记挽救 | 第19-20页 |
| ·ADH2基因敲除原理 | 第20-22页 |
| ·基因敲除的验证方法 | 第22-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基和培养条件 | 第25-26页 |
| ·菌种保藏斜面培养基 | 第25-26页 |
| ·培养条件 | 第26页 |
| ·试剂与溶液的配制 | 第26-28页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第28页 |
| ·工具酶 | 第28页 |
| ·其它试剂 | 第28-29页 |
| ·常用仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·冷冻干燥菌种的恢复培养 | 第29页 |
| ·安瓿管开封 | 第29页 |
| ·菌株恢复培养 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的转化 | 第30页 |
| ·碱裂解法制备pUG6和pSH65质粒DNA | 第30-31页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第31-32页 |
| ·乙醇沉淀DNA | 第32页 |
| ·菌落PCR验证酵母菌落 | 第32-33页 |
| ·平板影印法 | 第33页 |
| ·LiAc/SS载体DNA/PEG高效酵母转化法 | 第33-37页 |
| 第3章 结果与分析 | 第37-73页 |
| ·ADH2等位基因缺失的酿酒酵母杂合子的构建 | 第37-55页 |
| ·验证引物的设计 | 第37-40页 |
| ·菌落PCR验证出引物的正确性 | 第40-41页 |
| ·质粒pUG6的制备 | 第41-42页 |
| ·质粒pUG6的限制性内切酶酶切 | 第42-43页 |
| ·ADH2基因敲除序列组件的构建 | 第43-49页 |
| ·嵌合引物的设计 | 第43-48页 |
| ·ADH2基因敲除序列组件的构建 | 第48-49页 |
| ·转化ADH2基因敲除序列组件及筛选转化子 | 第49-50页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·菌落PCR验证ADH2等位基因敲除菌株 | 第51-55页 |
| ·ADH2基因敲除酿酒酵母菌株的构建 | 第55-73页 |
| ·质粒pSH65的制备 | 第56-57页 |
| ·质粒pSH65的限制性内切酶酶切 | 第57-63页 |
| ·质粒pSH65的转化 | 第63-64页 |
| ·kanMX标记基因的诱导切除 | 第64-67页 |
| ·菌落PCR验证标记挽救后的ADH2杂合子 | 第67-68页 |
| ·质粒pSH65的移除 | 第68-69页 |
| ·ADH2基因敲除双倍体菌株的获得 | 第69-72页 |
| ·出发菌株与ADH2基因敲除菌株形态比较 | 第72-73页 |
| 第4章 讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 个人简历 | 第87-88页 |
