| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 一、背景 | 第12-13页 |
| 二、PCT的来源 | 第13页 |
| 三、PCT的合成 | 第13-14页 |
| 四、PCT释放的调节 | 第14页 |
| 五、PCT的生物学作用 | 第14-15页 |
| 六、PCT的临床应用 | 第15-16页 |
| 第一部分: PCT基因的重组及鉴定 | 第16-30页 |
| 1. 实验目的 | 第16页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第16-21页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器与设备 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·相关试剂的配制 | 第16-17页 |
| ·引物合成 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-21页 |
| ·基因序列和引物序列设计 | 第17-18页 |
| ·目的基因的合成 | 第18页 |
| ·目的基因的扩增 | 第18-19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19页 |
| ·目的基因的克隆 | 第19-20页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第20-21页 |
| 3. 实验结果 | 第21-26页 |
| ·基因序列的设计 | 第21-22页 |
| ·目的基因的扩增 | 第22页 |
| ·目的基因的克隆与阳性重组子的筛选 | 第22-26页 |
| 4. 讨论 | 第26-30页 |
| 第二部分: PCT蛋白的表达及纯化 | 第30-44页 |
| 1. 实验目的 | 第30页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第30-35页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·相关试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·PCT目的基因片断的纯化与酶切 | 第31-32页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第32页 |
| ·重组克隆的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组基因的诱导表达 | 第33页 |
| ·PCT蛋白与PCT单克隆抗体Western blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·PCT蛋白表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·PCT蛋白的大量制备 | 第35页 |
| ·PCT蛋白的纯化 | 第35页 |
| 3. 实验结果 | 第35-42页 |
| ·pGEX-4T-1/PCT重组表达质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的表达 | 第36-38页 |
| ·PCT蛋白与PCT单克隆抗体Western blot鉴定 | 第38页 |
| ·PCT蛋白表达条件的优化 | 第38-40页 |
| ·PCT蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-44页 |
| 第三部分: PCT单克隆抗体的制备 | 第44-52页 |
| 1. 实验目的 | 第44页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第44-49页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要仪器与设备 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·相关试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·细胞和动物 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·动物免疫 | 第45页 |
| ·配液 | 第45页 |
| ·制备饲养细胞和脾细胞 | 第45-46页 |
| ·免疫脾细胞的收集 | 第46页 |
| ·SP2/0的准备 | 第46页 |
| ·细胞融合 | 第46页 |
| ·筛选 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA | 第47页 |
| ·蛋白特异性的鉴定 | 第47-48页 |
| ·有限稀释法克隆化 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第49页 |
| 3. 实验结果 | 第49-50页 |
| ·动物免疫 | 第49页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立 | 第49-50页 |
| ·蛋白特异性的鉴定 | 第50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录一: 文献综述《降钙素原的临床诊断价值》 | 第57-65页 |
| 附录二: 缩略词表 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第69-70页 |