大豆茎褐腐病原菌分子检测技术研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 大豆茎褐腐病的发生情况 | 第10页 |
| ·大豆茎褐腐病的分布 | 第10页 |
| ·大豆茎褐腐病的危害及损失 | 第10页 |
| 2 大豆茎褐腐病的研究现状 | 第10-14页 |
| ·病原菌 | 第10页 |
| ·病原菌生物学特性 | 第10-11页 |
| ·病原菌致病性分化 | 第11页 |
| ·症状 | 第11-12页 |
| ·病害侵染循环与传播途径 | 第12页 |
| ·病原菌的分离与鉴定 | 第12-14页 |
| ·形态观察 | 第12页 |
| ·选择性培养基 | 第12-13页 |
| ·分子生物学方法 | 第13-14页 |
| 3 病害防治 | 第14页 |
| ·药剂防治 | 第14页 |
| ·农业防治 | 第14页 |
| ·品种抗性利用 | 第14页 |
| 4 中国对进口大豆的检疫状况 | 第14-15页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| ·研究的目的 | 第15页 |
| ·研究的意义 | 第15-17页 |
| 第二章 大豆茎褐腐病菌的分子检测 | 第17-34页 |
| 1 材料 | 第17-18页 |
| ·供试菌株 | 第17-18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-23页 |
| ·试剂和培养基的配制 | 第18-19页 |
| ·固体培养基培养和液体培养基振荡培养 | 第19页 |
| ·真菌菌丝核酸的提取 | 第19页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·真菌通用引物ITS4/5 | 第19页 |
| ·BSR病原菌ITS区特异引物的设计 | 第19-20页 |
| ·PCR反应 | 第20-21页 |
| ·PCR反应体系及扩增条件 | 第20页 |
| ·真菌通用引物的常规PCR反应 | 第20页 |
| ·BSR特异性引物的筛选 | 第20页 |
| ·BSR特异性引物PCR反应的条件优化 | 第20页 |
| ·PCR产物电泳分析 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的克隆和序列测定 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第21页 |
| ·连接 | 第21页 |
| ·转化 | 第21页 |
| ·克隆筛选和测序 | 第21-22页 |
| ·接种植物提取物的分子检测 | 第22页 |
| ·BSR的实时荧光PCR反应 | 第22-23页 |
| ·实时荧光PCR反应体系及条件 | 第22-23页 |
| ·实时荧光PCR特异性引物的筛选 | 第23页 |
| ·实时荧光PCR特异性引物的灵敏度测试 | 第23页 |
| 3 结果和分析 | 第23-34页 |
| ·PCR反应结果 | 第23-27页 |
| ·真菌通用引物ITS4/5的PCR反应结果 | 第23-24页 |
| ·引物筛选结果 | 第24-26页 |
| ·PCR反应结果及优化 | 第26页 |
| ·特异性引物Pg1/4的特异性 | 第26-27页 |
| ·特异性引物Pg1/4的灵敏度测试 | 第27页 |
| ·测序结果 | 第27-28页 |
| ·实时荧光PCR反应结果 | 第28-31页 |
| ·实时荧光PCR反应优化条件 | 第28页 |
| ·实时荧光PCR的特异性 | 第28-29页 |
| ·实时荧光的灵敏度 | 第29-30页 |
| ·绝对定量标准曲线的建立 | 第30页 |
| ·BSR荧光定量PCR的重复性和稳定性 | 第30-31页 |
| ·供试菌株回接寄主植物 | 第31-34页 |
| ·接种成功后的症状 | 第31-33页 |
| ·接种植物PCR反应结果 | 第33-34页 |
| 第三章 结论和讨论 | 第34-36页 |
| 1 结论 | 第34页 |
| ·PCR与荧光PCR的结合 | 第34页 |
| 2 讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 作者简历 | 第41页 |
