| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 金属硫蛋白 | 第12-15页 |
| ·MT的结构与性质 | 第12-14页 |
| ·MT的主要功能 | 第14-15页 |
| 2 绿色荧光蛋白 | 第15-18页 |
| ·GFP的结构与性质 | 第15-16页 |
| ·GFP作为标记分子的优势 | 第16-17页 |
| ·GFP的主要应用 | 第17-18页 |
| 3 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-20页 |
| 4 本研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 金属硫蛋白重组表达载体的构建 | 第21-36页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第21页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第21-22页 |
| ·PCR引物 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-30页 |
| ·重组表达载体构建流程 | 第23-25页 |
| ·提取酵母基因组DNA | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·DNA酶切 | 第27页 |
| ·DNA连接与转化 | 第27-29页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-35页 |
| ·重组载体pCUP9K的构建 | 第30-31页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·载体多克隆位点的酶切 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体pCUP9K-GFP的构建 | 第33页 |
| ·重组表达载体pCUP9K-AsMT2b-GFP的构建 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-AsMT2b-GFP的构建 | 第34-35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 重组表达载体转化毕赤酵母 | 第36-42页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第36页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-39页 |
| ·单酶切重组表达载体 | 第36-37页 |
| ·制备酵母感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·氯化锂法转化酵母细胞 | 第38页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第38页 |
| ·工程菌的荧光检测 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-41页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第39页 |
| ·工程菌的构建 | 第39-40页 |
| ·工程菌中目的基因的表达 | 第40-41页 |
| 4 结论 | 第41-42页 |
| 第四章 工程菌对重金属胁迫响应的研究 | 第42-51页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第42-43页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·生化试剂 | 第42页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| ·重金属对工程菌荧光强度的影响 | 第43页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第43-45页 |
| ·重金属对工程菌生长的影响 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-50页 |
| ·工程菌对重金属的荧光响应 | 第45-47页 |
| ·工程菌表达目的蛋白 | 第47-48页 |
| ·工程菌对重金属的抗性 | 第48-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简况及联系方式 | 第62-64页 |