| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 植物抗逆性及相关转录因子的研究进展 | 第14-38页 |
| 1.植物对逆境应答的分子机制 | 第14-21页 |
| ·抵抗渗透胁迫中直接起作用的物质 | 第14-16页 |
| ·LEA蛋白 | 第14-15页 |
| ·渗透调节物质 | 第15-16页 |
| ·抗氧化酶系统 | 第16页 |
| ·植物转录因子在逆境胁迫中的作用 | 第16-21页 |
| ·转录因子的概念 | 第17页 |
| ·转录因子的结构 | 第17-20页 |
| ·转录因子的活性调控 | 第20-21页 |
| ·逆境信号传导过程中的转录因子 | 第21页 |
| 2 植物抗逆相关转录因子的研究进展 | 第21-29页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第22-23页 |
| ·MYC/MYB类转录因子 | 第23页 |
| ·AP2/EREBP转录因子家族的特征、分类和功能 | 第23-29页 |
| ·DREB类转录因子 | 第25-27页 |
| ·ERF类转录因子 | 第27-29页 |
| 3.RACE技术的研究进展 | 第29-34页 |
| ·RACE技术原理 | 第30页 |
| ·几种常见的RACE技术 | 第30-32页 |
| ·锚连接RACE | 第30-31页 |
| ·RNA连接酶介导RACE | 第31页 |
| ·抑制性RACE | 第31页 |
| ·环化的第一链cDNA介导的RACE | 第31-32页 |
| ·RACE技术在植物基因分离中的应用 | 第32页 |
| ·RACE步骤的改良 | 第32-34页 |
| ·提高反转录效率 | 第32-33页 |
| ·提高PCR扩增产物的特异性 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·应用简并引物 | 第33页 |
| ·5′RACE产物的克隆 | 第33-34页 |
| 4.目前已克隆到的一些果树基因 | 第34-35页 |
| 5.本研究的研究目的及其研究内容 | 第35-38页 |
| ·立题依据 | 第35-37页 |
| ·技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 水稻ERF类转录因子OsAP25的克隆及表达分析 | 第38-52页 |
| 1.材料与方法 | 第38-40页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·菌株及质粒 | 第38-39页 |
| ·化学试剂、酶制剂及试剂盒 | 第39页 |
| ·培养基及溶液 | 第39-40页 |
| ·引物 | 第40页 |
| 2.实验方法 | 第40-44页 |
| ·顺式作用元件的合成 | 第40页 |
| ·质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·酵母操作技术及质粒转化 | 第41-42页 |
| ·DNA操作 | 第42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42页 |
| ·植物材料处理 | 第42页 |
| ·RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第43页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第43-44页 |
| ·模板cDNA的相对定量 | 第43-44页 |
| ·OsAP25基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 3.结果与分析 | 第44-50页 |
| ·植物顺式调控元件ERE2-cis的合成 | 第44页 |
| ·水稻编码ERF结合蛋白的cDNA的筛选 | 第44-45页 |
| ·OsAP25 cDNA核苷酸及推测的氨基酸序列分析 | 第45页 |
| ·OsAP25同源性分析 | 第45-47页 |
| ·OsAP25二级结构分析 | 第47-48页 |
| ·OsAP25表达模式分析 | 第48-50页 |
| 4.讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 八棱海棠DREB类转录因子MrDREB2A的克隆及表达分析 | 第52-76页 |
| 1.材料与方法 | 第53-55页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌株及质粒 | 第53页 |
| ·仪器及设备 | 第53页 |
| ·试剂盒及购买的试剂 | 第53-54页 |
| ·自配的主要试剂 | 第54-55页 |
| ·PCR引物 | 第55页 |
| 2.实验方法 | 第55-65页 |
| ·RACE cDNA文库的构建 | 第55-58页 |
| ·CTAB法抽提八棱海棠不同处理苗RNA | 第55-56页 |
| ·RNA纯化 | 第56-57页 |
| ·从八棱海棠mRNA合成第一链cDNA | 第57-58页 |
| ·目的基因保守结构域的获得 | 第58页 |
| ·目的片段回收,克隆,鉴定及测序 | 第58-61页 |
| ·凝胶电泳条带的柱层析回收 | 第58页 |
| ·DNA回收片段与pMD18-T Vector的连接 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第59页 |
| ·DNA与pMD18-T Vector的连接产物转化DH5α感受态 | 第59-60页 |
| ·转化重组载体后的DH5α单菌落培养和碱法小量提取质粒DNA | 第60页 |
| ·引物合成、转化重组子的鉴定、测序 | 第60-61页 |
| ·3’RACE | 第61-62页 |
| ·5’RACE | 第62-63页 |
| ·生物信息学分析 | 第63页 |
| ·植物材料处理 | 第63页 |
| ·总RNA的抽提(CTAB法) | 第63页 |
| ·总RNA中基因组DNA的去除 | 第63-64页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第64-65页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第65页 |
| ·模板cDNA的相对定量 | 第65页 |
| ·MrDREB2A PCR扩增 | 第65页 |
| 3.结果与分析 | 第65-73页 |
| ·八棱海棠总RNA的抽提 | 第65-66页 |
| ·八棱海棠MrDREB2A保守结构域的获得 | 第66页 |
| ·3'RACE | 第66页 |
| ·5’RACE | 第66-67页 |
| ·MrDREB2A cDNA核苷酸及预测的氨基酸序列分析 | 第67页 |
| ·MrDREB2A同源性分析 | 第67-70页 |
| ·MrDREB2A二级结构分析 | 第70-71页 |
| ·MrDREB2A表达模式分析 | 第71-73页 |
| 4.讨论 | 第73-76页 |
| 总结与讨论 | 第76-77页 |
| 1.结论 | 第76页 |
| 2.讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
