| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第13-25页 |
| ·猪圆环病毒的发现和命名 | 第13页 |
| ·猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第13-15页 |
| ·猪圆环病毒的全球流行和分布状况 | 第15页 |
| ·猪圆环病毒的形态学特性 | 第15-16页 |
| ·游离的 PCV 病毒 | 第15页 |
| ·感染细胞内的 PCV 病毒 | 第15-16页 |
| ·猪圆环病毒的理化特性 | 第16页 |
| ·浮密度及沉降系数 | 第16页 |
| ·理化抗性 | 第16页 |
| ·猪圆环病毒的基因组 | 第16-17页 |
| ·猪圆环病毒的复制与转录 | 第17-18页 |
| ·猪圆环病毒编码蛋白的研究 | 第18-19页 |
| ·猪2 型圆环病毒引起的疾病及其致病机理 | 第19-21页 |
| ·病理学研究 | 第21-22页 |
| ·猪圆环病毒感染的诊断 | 第22-24页 |
| ·病毒分离 | 第22页 |
| ·间接免疫荧光试验（IIF） | 第22页 |
| ·聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR） | 第22-23页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第23页 |
| ·原位核酸杂交试验（ISH） | 第23-24页 |
| ·猪圆环病毒感染的防制 | 第24-25页 |
| 第二章 本研究所用表达载体及技术路线简介 | 第25-32页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白研究进展 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的优缺点 | 第25页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的特性及存在形式 | 第25页 |
| ·影响大肠杆菌表达系统表达外源蛋白的因素 | 第25-26页 |
| ·腺病毒表达系统 | 第26-30页 |
| ·腺病毒的基本结构 | 第27页 |
| ·腺病毒的感染机制 | 第27页 |
| ·腺病毒作为载体的发展 | 第27-28页 |
| ·应用腺病毒表达系统表达外源基因的优点 | 第28-29页 |
| ·在 AdEasy 腺病毒载体系统操作过程需注意一些问题 | 第29页 |
| ·腺病毒载体的发展前景 | 第29-30页 |
| ·论文设计思路及技术路线 | 第30-32页 |
| 第三章 陕西省 PMWS 的血清学调查 | 第32-37页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33页 |
| ·血清 PCV2 抗体检测 | 第33页 |
| ·部分血清样品 PRV 抗体检测结果 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-37页 |
| 第四章 猪2 型圆环病毒陕西株的分离鉴定 | 第37-42页 |
| ·试剂与材料 | 第37页 |
| ·试剂与细胞系 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·PCV2 的分离 | 第37-38页 |
| ·设计引物 | 第37页 |
| ·病料的 PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·PCV2 的分离与培养 | 第38页 |
| ·PCV2 的鉴定 | 第38-39页 |
| ·PCV2的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-40页 |
| ·PC27R 鉴定结果 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 猪2 型圆环病毒SX 株ORF2 基因的克隆与序列分析 | 第42-48页 |
| ·材料与方法 | 第42-43页 |
| ·病毒、质粒和菌种 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·模板的制备 | 第42-43页 |
| ·ORF2 基因的扩增及其克隆 | 第43页 |
| ·序列分析 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·ORF2基因的PCR扩增 | 第43页 |
| ·重组质粒的筛选结果 | 第43页 |
| ·测序结果及核苷酸序列同源性分析 | 第43-44页 |
| ·SX 株ORF2 基因编码的氨基酸抗原性和亲水性分析 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第六章 猪2 型圆环病毒（PCV2）ORF2 基因的克隆表达与间接ELISA 检测方法研究 | 第48-63页 |
| ·材料与方法 | 第48-49页 |
| ·宿主菌、质粒及PCV2 参考血清 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要药品及试剂 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-56页 |
| ·目的片段的扩增、纯化与回收 | 第49-50页 |
| ·目的基因的克隆 | 第50-52页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第52-53页 |
| ·ORF2 基因原核表达载体的构建 | 第53页 |
| ·重组融合蛋白pBAD/gIII-ORF2 的诱导表达及检测 | 第53-56页 |
| ·重组蛋白的纯化与复性及 ELISA 方法的建立 | 第56-57页 |
| ·重组融合蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| ·纯化蛋白的复性 | 第57页 |
| ·ELISA 方法的建立 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·PCR 扩增 | 第57页 |
| ·重组质粒pBAD/gⅢ-ORF2 的酶切和PCR 鉴定 | 第57-58页 |
| ·ORF2 表达产物的SDS-PAGE 检测和Western blot 分析 | 第58页 |
| ·表达产物的纯化及复性 | 第58-60页 |
| ·ELISA 方法的建立 | 第60-61页 |
| ·特异性鉴定 | 第61页 |
| ·临床送检血清的 ELISA 检测 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第七章 猪2 型圆环病毒ORF2 基因重组腺病毒的构建及其表达 | 第63-79页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·质粒、菌种及细胞株 | 第63页 |
| ·工具酶及试剂 | 第63页 |
| ·仪器与设备 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·pBAD/gⅢ/B、pAdeasy-1、pAdTrack-CMV 的转化扩增及质粒提取 | 第63-64页 |
| ·引物设计、合成与目的基因的获得 | 第64页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定 | 第64-67页 |
| ·pAdEasy-1 和pAdTrack-CMV-ORF2 同源重组 | 第67-68页 |
| ·pAdEasier 的制备 | 第67页 |
| ·pAdEasier 感受态的制备（CaC12 法） | 第67页 |
| ·穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF2 线性化及纯化 | 第67-68页 |
| ·线性化的pAdTrack-CMV-ORF2 转化感受态pAdEasier 进行同源重组 | 第68页 |
| ·同源重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2 的电泳及PCR 鉴定 | 第68页 |
| ·重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2 扩增及纯化 | 第68页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF2 的制备 | 第68-70页 |
| ·293 细胞的复苏和培养 | 第68-69页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF2 的包装 | 第69页 |
| ·重组腺病毒 AdCMV-ORF2 的 PCR 鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组腺病毒载体表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第70页 |
| ·重组腺病毒载体表达产物的 Western Blot 鉴定 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-77页 |
| ·ORF2基因的PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·ORF2 重组穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF2 的构建及鉴定 | 第71-73页 |
| ·同源重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2 的构建及鉴定 | 第73-74页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF2 及其表达产物的鉴定 | 第74-76页 |
| ·AdCMV-ORF2 表达ORF2 的SDS-PAGE、Western Blot 鉴定 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·ORF2 基因的克隆 | 第77页 |
| ·ORF2 重组蛋白的分子水平鉴定 | 第77页 |
| ·腺病毒载体系统AdEasy 是新型高效的目的基因转移系统 | 第77页 |
| ·构建PCV2 ORF2 基因重组腺病毒的意义 | 第77-79页 |
| 第八章 重组腺病毒AD-ORF2对小鼠的免疫试验 | 第79-84页 |
| ·材料和方法 | 第79-81页 |
| ·材料 | 第79-80页 |
| ·方法 | 第80-81页 |
| ·结果 | 第81-82页 |
| ·重组腺病毒滴度的测定 | 第81页 |
| ·免疫小鼠重组腺病毒Ad-ORF2 特异性IgG 的测定结果 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
