| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第15-31页 |
| 1 PRRSV基因组成及结构蛋白 | 第15-17页 |
| 2 PRRSV的组织嗜性与受体 | 第17-18页 |
| 3 PRRSV病毒复制与蛋白功能 | 第18-22页 |
| 4 预防PRRSV感染的疫苗研究 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 第二章 siRNA干扰病毒复制研究进展 | 第31-49页 |
| 1 siRNA靶序列的选择 | 第31-34页 |
| 2 siRNA的获得和导入途径 | 第34-37页 |
| 3 siRNA的应用 | 第37-41页 |
| 4 RNA干扰的局限性 | 第41页 |
| 5 结语 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 第三章 pSUPER质粒作为RNA干扰研究平台的可行性研究 | 第49-63页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-55页 |
| 2 结果 | 第55-56页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第55页 |
| ·RNA干扰效果的检测 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 英文摘要 | 第62-63页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒实时PCR检测方法的建立 | 第63-74页 |
| 1 材料与方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| 2 结果 | 第66-67页 |
| ·实时PCR反应体系的优化 | 第66页 |
| ·实时PCR重复性实验 | 第66页 |
| ·实时PCR特异性实验 | 第66页 |
| ·实时PCR敏感性实验 | 第66页 |
| ·实时PCR与常规PCR敏感性比较 | 第66页 |
| ·实时PCR对PRRS疑似猪组织样品的检测 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 英文摘要 | 第73-74页 |
| 第五章 质粒转染Marc145细胞条件的优化 | 第74-86页 |
| 1 材料与方法 | 第74-78页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-78页 |
| 2 结果 | 第78-79页 |
| ·脂质体与质粒比例 | 第78页 |
| ·转染试剂的选择 | 第78页 |
| ·最佳转染剂量 | 第78-79页 |
| ·细胞密度 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 英文摘要 | 第85-86页 |
| 第六章 PRRSV不同ORFs基因和5'UTR序列shRNA表达质粒的构建与鉴定 | 第86-102页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-89页 |
| 2 结果 | 第89-91页 |
| ·shRNA的设计 | 第90页 |
| ·shRNA表达载体的构建与鉴定 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-98页 |
| 参考文献 | 第98-101页 |
| 英文摘要 | 第101-102页 |
| 第七章 PRRSV不同ORFs基因和5'UTR序列shRNA对靶基因转录和表达的特异性抑制 | 第102-123页 |
| 1 材料 | 第103-104页 |
| 2 方法 | 第104-110页 |
| 3 结果 | 第110-111页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第110页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第110页 |
| ·ORFs-EGFP和UTR-EGFP于HEK293A细胞融合表达鉴定 | 第110-111页 |
| ·shRNA表达质粒对靶基因在蛋白质水平上的特异性抑制 | 第111页 |
| ·shRNA表达质粒对靶基因在mRNA水平上的特异性抑制 | 第111页 |
| 4 讨论 | 第111-119页 |
| 参考文献 | 第119-121页 |
| 英文摘要 | 第121-123页 |
| 第八章 PRRSV ORF5和ORF7编码区shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究 | 第123-144页 |
| 1 材料与方法 | 第124-127页 |
| ·材料 | 第124-125页 |
| ·方法 | 第125-127页 |
| 2 结果 | 第127-131页 |
| ·shRNA表达质粒抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制 | 第127-128页 |
| ·shRNA表达质粒对PRRSV复制的抑制作用有剂量依赖性 | 第128-129页 |
| ·shRNA表达质粒抑制PRRSV复制的序列特异性 | 第129-130页 |
| ·shRNA表达质粒抑制PRRSV复制具有作用相加性 | 第130页 |
| ·shRNA表达质粒能持续性的抑制PRRSV复制 | 第130页 |
| ·先感染PRRSV再转染shRNA表达质粒抑制作用依然存在 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-140页 |
| 参考文献 | 第140-143页 |
| 英文摘要 | 第143-144页 |
| 第九章 PRRSV ORF1b、ORF6编码区和5UTR shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的观察 | 第144-153页 |
| 1 材料与方法 | 第145-146页 |
| ·材料 | 第145页 |
| ·方法 | 第145-146页 |
| 2 结果 | 第146页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第146页 |
| ·病毒滴度测定 | 第146页 |
| ·实时PCR对病毒mRNA水平的检测 | 第146页 |
| 3 讨论 | 第146-150页 |
| 参考文献 | 第150-152页 |
| 英文摘要 | 第152-153页 |
| 全文总结 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第156页 |
