| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-30页 |
| ·胰岛素样生长因子及其研究现状 | 第10-16页 |
| ·胰岛素样生长因子的组成及生理作用 | 第10-13页 |
| ·IGF-1结构及特点 | 第13-16页 |
| ·IGF-I研究前景 | 第16页 |
| ·原核表达真核基因 | 第16-21页 |
| ·真核基因的大肠杆菌表达体系 | 第16-17页 |
| ·pGEX | 第17-18页 |
| ·关于包涵体 | 第18-21页 |
| ·基因工程重组蛋白下游纯化技术 | 第21-26页 |
| ·扩张柱床吸附技术 | 第22-23页 |
| ·径向膜层析技术 | 第23页 |
| ·灌注层析技术 | 第23页 |
| ·置换层析技术 | 第23-24页 |
| ·金属螯合亲和层析的新运用 | 第24-25页 |
| ·亲和层析(AC) | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-30页 |
| 2 胰岛素样生长因子-1的克隆及序列分析 | 第30-41页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂和材料 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·精制PCR产物 | 第31-32页 |
| ·双酶切PCR产物及空表达载体 | 第32页 |
| ·回收双酶切产物 | 第32-33页 |
| ·纯化回收的DNA片断 | 第33-34页 |
| ·载体与目的基因的连接 | 第34页 |
| ·转化JM109 | 第34页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第34-35页 |
| ·扩增并提取质粒 | 第35-36页 |
| ·转化BL21(DE3)并筛选阳性克隆 | 第36-37页 |
| ·IGF-1在大肠杆菌中诱导表达 | 第37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-40页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·表达载体的构建及重组质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 3 胰岛素样生长因子-1的表达、纯化 | 第41-64页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·实验药品和仪器 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·培养基配制 | 第42页 |
| ·菌体的大规模培养 | 第42页 |
| ·表达组分分析 | 第42-43页 |
| ·胰岛素样生长因子-1的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·蛋白浓度的确定 | 第44页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第44-45页 |
| ·蛋白质免疫印记(Western-blotting) | 第45-46页 |
| ·MTT | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-61页 |
| ·含有胰岛素样生长因子-1基因的重组大肠杆菌大规模培养 | 第46-48页 |
| ·表达条件的优化 | 第48-51页 |
| ·融合蛋白的初步纯化及包涵体复性纯化最优条件的筛选 | 第51-60页 |
| ·胰岛素样生长因子-1的获得及鉴定 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 4 结论与展望 | 第64-66页 |
| ·主要结论 | 第64页 |
| ·创新点 | 第64页 |
| ·展望 | 第64-66页 |
| 附录A 附录内容名称 | 第66-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 大连理工大学学位论文版权使用授权书 | 第70页 |
