| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一部分 高羊茅高频再生体系的建立和基因枪法介导的遗传转化研究 | 第10-35页 |
| Ⅰ 综述 | 第10-18页 |
| 1 草坪草遗传转化的研究进展 | 第10-11页 |
| 2 草坪草遗传转化的主要方法 | 第11-15页 |
| ·基因枪转化法 | 第11-13页 |
| ·影响基因枪转化的因素 | 第12-13页 |
| ·农杆菌介导法 | 第13-14页 |
| ·原生质体转化法 | 第14页 |
| ·硅碳纤维介导法 | 第14-15页 |
| 3 报告基因及选择标记基因 | 第15-17页 |
| ·报告基因 | 第15-16页 |
| ·选择标记基因 | 第16-17页 |
| 4 转基因草坪草的分子生物学检测 | 第17-18页 |
| 5 本实验的研究目的和意义 | 第18页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第18-24页 |
| 1 高羊茅高频再生体系的建立 | 第18-19页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-19页 |
| ·成熟胚愈伤组织的诱导 | 第18页 |
| ·愈伤组织的继代培养 | 第18页 |
| ·胚性愈伤组织的分化 | 第18-19页 |
| ·再生苗的生根及移栽 | 第19页 |
| 2 用基因枪法将水稻几丁质酶基因导入高羊茅的研究 | 第19-24页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·质粒的构建、提取、检测和酶切分析 | 第19-22页 |
| ·质粒的构建 | 第19-20页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第20-21页 |
| ·质粒DNA的电泳检测 | 第21页 |
| ·紫外分光光度法测定质粒DNA含量 | 第21页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第21-22页 |
| ·金粒的制备 | 第22页 |
| ·材料的渗透处理 | 第22页 |
| ·基因枪轰击 | 第22页 |
| ·转化体的筛选及植株的再生 | 第22-23页 |
| ·再生植株的分子生物学鉴定 | 第23-24页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第24页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第24-31页 |
| 1 影响再生体系的因素 | 第24-27页 |
| ·2，4-D质量浓度对愈伤组织诱导的影响 | 第24-25页 |
| ·不同继代培养基对胚性愈伤组织发生及分化的影响 | 第25-26页 |
| ·6-BA质量浓度对胚性愈伤组织分化的影响 | 第26-27页 |
| ·高羊茅再生苗的生根与移栽 | 第27页 |
| 2 将水稻几丁质酶基因RC-24导入高羊茅胚性愈伤组织 | 第27-31页 |
| ·微弹不同的用量和轰击次数对GUS表达的影响 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第28-29页 |
| ·经PPT筛选的胚性愈伤组织 | 第29-30页 |
| ·再生苗除草剂喷洒筛选实验 | 第30页 |
| ·转化高羊茅植株的PCR分析 | 第30-31页 |
| Ⅳ 讨论 | 第31-35页 |
| 1 高羊茅高频再生体系的影响因素 | 第31-32页 |
| 2 用基因枪法将水稻几丁质酶基因导入高羊茅的研究 | 第32-35页 |
| 第二部分: 高羊茅几丁质酶基因Ⅰ保守片段的克隆及其序列分析 | 第35-64页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第35-40页 |
| 1: 植物几丁质酶的分子生物学研究进展 | 第35-36页 |
| ·几丁质酶的活性诱导 | 第35页 |
| ·几丁质酶的分布定位 | 第35-36页 |
| ·几丁质酶的类型及其结构特征 | 第36页 |
| 2: 植物几丁质酶基因的结构 | 第36-39页 |
| ·几丁质酶基因的特征 | 第36-37页 |
| ·几丁质酶基因组的结构 | 第37-39页 |
| 3: 几丁质酶的同源性比对分析 | 第39页 |
| 4: 植物几丁质酶的应用前景 | 第39-40页 |
| Ⅱ 实验部分 | 第40-62页 |
| 1 材料和方法 | 第40-45页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·总RNA和DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·植物基因组 DNA的提取 | 第41页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR和PCR反应 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·PCR和RT-PCR反应 | 第42页 |
| ·RT-PCR和PCR反应产物的回收 | 第42-43页 |
| ·DNA与载体的连接 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第44页 |
| ·重组质粒的提取 | 第44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·DNA序列测定 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-62页 |
| ·总RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·利用简并引物进行RT-PCR和PCR反应 | 第46-54页 |
| ·几种禾本科植物Ⅰ类几丁质酶的氨基酸序列及核苷酸序列比对 | 第46-51页 |
| ·PCR反应条件和体系 | 第51-53页 |
| ·扩增片断与T载体的连接 | 第53-54页 |
| ·测序结果分析 | 第54-62页 |
| Ⅲ 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
