| 引言 | 第1-16页 |
| 文献回顾 | 第16-30页 |
| 第一节 中医证候研究现状 | 第16-20页 |
| 1.中医证候概念的探讨 | 第16-17页 |
| 2.中医证候现代研究进展与展望 | 第17-20页 |
| 第二节 HSP70在肿瘤免疫领域的研究进展 | 第20-30页 |
| 1.热休克蛋白70在肿瘤中的表达调控及意义 | 第20-22页 |
| 2.热休克蛋白70-多肽复合物在肿瘤免疫领域的应用基础研究 | 第22-27页 |
| 3.肿瘤疫苗热休克蛋白—多肽复合物的临床应用研究 | 第27-30页 |
| 实验研究 | 第30-54页 |
| 第一节 本课题主要研究内容及技术路线 | 第30-32页 |
| 1.研究目标 | 第30页 |
| 2.研究内容 | 第30页 |
| 3.研究方法 | 第30-31页 |
| 4.技术路线 | 第31-32页 |
| 第二节 HSP70-PC的提取、分离和纯化 | 第32-42页 |
| 1.实验材料 | 第32-36页 |
| ·病例选择和样本收集 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要实验器材 | 第33页 |
| ·主要溶液配制 | 第33-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-40页 |
| ·实验技术路线 | 第36页 |
| ·实验步骤 | 第36-40页 |
| ·组织总蛋白的制备 | 第36-37页 |
| ·ADP-agarose亲和层析 | 第37-38页 |
| ·SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38页 |
| ·DEAE离子交换层析 | 第38-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-42页 |
| ·ADP亲和层析纯化结果 | 第40-41页 |
| ·DEAE离子交换层析纯化结果 | 第41-42页 |
| 第三节 HSP70-PC的定性鉴定和定量检测 | 第42-46页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要实验器材 | 第42-43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| ·实验技术路线 | 第43-44页 |
| ·Western-blot定性鉴定 | 第44页 |
| ·SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| ·转膜 | 第44页 |
| ·抗体杂交 | 第44页 |
| ·DAB显色反应 | 第44页 |
| ·Bradford定量检测 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-46页 |
| ·Western-blot定性鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·Bradford定量结果 | 第46页 |
| 第四节 人肺癌A-549肿瘤细胞的培养 | 第46-50页 |
| 1 实验材料 | 第46-48页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要实验器材 | 第46-47页 |
| ·主要溶液配制 | 第47-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-49页 |
| ·冻存细胞复苏 | 第48页 |
| ·培养细胞换液 | 第48页 |
| ·肿瘤细胞传代培养 | 第48页 |
| ·细胞计数 | 第48-49页 |
| ·培养细胞冻存 | 第49页 |
| 3 实验结果 | 第49-50页 |
| 第五节 不同证候患者肺癌及远端正常肺组织HSP70-PC对人肺癌细胞的影响 | 第50-54页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·细胞株 | 第50页 |
| ·外周静脉抗凝血 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要实验器材 | 第50页 |
| ·主要溶液配制 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| ·人外周血单个核细胞(PBMC)的分离 | 第50-51页 |
| ·HSP70-PC促淋巴细胞增殖效应试验 | 第51页 |
| ·HSP70-PC的肿瘤细胞毒功能试验 | 第51-52页 |
| ·统计学分析 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-54页 |
| ·人外周血单个核细胞(PBMC)分离结果 | 第52页 |
| ·HSP70-PC促淋巴细胞增殖效应的检测 | 第52-53页 |
| ·HSP70-PC肿瘤细胞毒功能的检测 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-61页 |
| 第一节 HSP70-PC分离纯化方法学探讨 | 第54-58页 |
| 第二节 不同证候患者肺癌HSP70-PC抗肿瘤免疫效应的探讨 | 第58-61页 |
| 结语 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 1.中英文缩略词表 | 第70-72页 |
| 2.附图 1：DEAE离子交换柱纯化后蛋白洗脱液SDS—PAGE结果 | 第72-74页 |
| 3.附图 2：ADP亲和层析柱纯化后蛋白洗脱液SDS—PAGE结果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
