摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-9页 |
第一章 前言 | 第9-19页 |
1 腺病毒载体 | 第9-12页 |
1.1 无肠腺病毒载体 | 第10-11页 |
1.2 辅助病毒 | 第11-12页 |
2 腺病毒载体的靶向可调控系统 | 第12-15页 |
2.1 GLP65杂合反式基因调控系统(RU486调控系统) | 第13页 |
2.2 人端粒酶逆转录酶(HTERT)启动子 | 第13-15页 |
3 细胞凋亡及其信号转导 | 第15-19页 |
3.1 胱冬肽酶(CASPASE)级联反应及其在凋亡中的作用 | 第16页 |
3.2 信号转导途径 | 第16-19页 |
第二章 质粒载体的靶向可调控性的研究 | 第19-33页 |
1 实验材料 | 第19-22页 |
1.1 菌株工具酶及试剂 | 第19页 |
1.2 细胞株 | 第19-21页 |
1.3 质粒 | 第21页 |
1.4 病毒 | 第21-22页 |
2 实验方法 | 第22-26页 |
2.1 HTERT启动子(-378- +78)的克隆及序列测定 | 第22页 |
2.2 端粒酶活性测定 | 第22页 |
2.3 报告基因的分析 | 第22-23页 |
2.4 质粒PRS-17的改造 | 第23页 |
2.5 PRS-HTERT载体的构建 | 第23-24页 |
2.6 PRS-HTERT载体萤火虫荧光素酶基因的靶向可调控分析 | 第24页 |
2.7 PRS-HTERT载体受RU486诱导表达外源基因TRAIL的定量分析 | 第24-26页 |
3 结果 | 第26-31页 |
3.1 HTERT启动子-378~+78的鉴定结果 | 第26-27页 |
3.2 端粒酶活性的肿瘤特异性 | 第27-28页 |
3.3 HTERT启动子的肿瘤专一性 | 第28-29页 |
3.4 PRS-HTERT载体携带LUCIFERASE在各种细胞中的靶向可调控表达 | 第29-30页 |
3.5 PRS-HTERT载体受RU486诱导表达外源基因TRAIL的定量分析 | 第30-31页 |
4 讨论 | 第31-33页 |
第三章 携带TRAIL基因的无肠腺病毒治疗肿瘤 | 第33-47页 |
1 实验材料 | 第33-34页 |
1.1 质粒及工具酶 | 第33页 |
1.2 菌株 | 第33页 |
1.3 细胞培养 | 第33页 |
1.4 病毒 | 第33-34页 |
2 实验方法 | 第34-40页 |
2.1 载体PRS-HTERT的构建 | 第34页 |
2.2 穿梭质粒PLSH的构建 | 第34页 |
2.3 无肠腺病毒包装质粒PGL-HTERT/TRAIL的构建 | 第34-36页 |
2.4 无肠腺病毒的包装及小规模扩增 | 第36页 |
2.5 病毒GL-AD-HTERT/TRAIL的鉴定 | 第36-37页 |
2.6 病毒的大量制备与CSCL密度梯度离心纯化病毒 | 第37-38页 |
2.7 无肠腺病毒的滴度及纯度测定 | 第38页 |
2.8 GL-AD-TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的检测 | 第38-40页 |
3 结果 | 第40-44页 |
3.1 病毒包装质粒的构建 | 第40页 |
3.2 病毒CSCL密度梯度离心纯化 | 第40-41页 |
3.3 病毒DNA的鉴定 | 第41页 |
3.4 GL-AD-TRAIL感染肿瘤细胞能引起细胞凋亡,但对正常细胞没有影响 | 第41-42页 |
3.5 GL-AD-TRAIL在肿瘤细胞7404中引起凋亡信号通路上的相关蛋白的表达 | 第42-43页 |
3.6 流式细胞仪检测GL-AD-TRAIL引起的肿瘤细胞7404的凋亡 | 第43-44页 |
4 讨论 | 第44-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
致谢 | 第52-53页 |