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用可调控靶向无肠腺病毒载体携带抗癌基因治疗恶性肿瘤的研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
第一章 前言第9-19页
 1 腺病毒载体第9-12页
  1.1 无肠腺病毒载体第10-11页
  1.2 辅助病毒第11-12页
 2 腺病毒载体的靶向可调控系统第12-15页
  2.1 GLP65杂合反式基因调控系统(RU486调控系统)第13页
  2.2 人端粒酶逆转录酶(HTERT)启动子第13-15页
 3 细胞凋亡及其信号转导第15-19页
  3.1 胱冬肽酶(CASPASE)级联反应及其在凋亡中的作用第16页
  3.2 信号转导途径第16-19页
第二章 质粒载体的靶向可调控性的研究第19-33页
 1 实验材料第19-22页
  1.1 菌株工具酶及试剂第19页
  1.2 细胞株第19-21页
  1.3 质粒第21页
  1.4 病毒第21-22页
 2 实验方法第22-26页
  2.1 HTERT启动子(-378- +78)的克隆及序列测定第22页
  2.2 端粒酶活性测定第22页
  2.3 报告基因的分析第22-23页
  2.4 质粒PRS-17的改造第23页
  2.5 PRS-HTERT载体的构建第23-24页
  2.6 PRS-HTERT载体萤火虫荧光素酶基因的靶向可调控分析第24页
  2.7 PRS-HTERT载体受RU486诱导表达外源基因TRAIL的定量分析第24-26页
 3 结果第26-31页
  3.1 HTERT启动子-378~+78的鉴定结果第26-27页
  3.2 端粒酶活性的肿瘤特异性第27-28页
  3.3 HTERT启动子的肿瘤专一性第28-29页
  3.4 PRS-HTERT载体携带LUCIFERASE在各种细胞中的靶向可调控表达第29-30页
  3.5 PRS-HTERT载体受RU486诱导表达外源基因TRAIL的定量分析第30-31页
 4 讨论第31-33页
第三章 携带TRAIL基因的无肠腺病毒治疗肿瘤第33-47页
 1 实验材料第33-34页
  1.1 质粒及工具酶第33页
  1.2 菌株第33页
  1.3 细胞培养第33页
  1.4 病毒第33-34页
 2 实验方法第34-40页
  2.1 载体PRS-HTERT的构建第34页
  2.2 穿梭质粒PLSH的构建第34页
  2.3 无肠腺病毒包装质粒PGL-HTERT/TRAIL的构建第34-36页
  2.4 无肠腺病毒的包装及小规模扩增第36页
  2.5 病毒GL-AD-HTERT/TRAIL的鉴定第36-37页
  2.6 病毒的大量制备与CSCL密度梯度离心纯化病毒第37-38页
  2.7 无肠腺病毒的滴度及纯度测定第38页
  2.8 GL-AD-TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的检测第38-40页
 3 结果第40-44页
  3.1 病毒包装质粒的构建第40页
  3.2 病毒CSCL密度梯度离心纯化第40-41页
  3.3 病毒DNA的鉴定第41页
  3.4 GL-AD-TRAIL感染肿瘤细胞能引起细胞凋亡,但对正常细胞没有影响第41-42页
  3.5 GL-AD-TRAIL在肿瘤细胞7404中引起凋亡信号通路上的相关蛋白的表达第42-43页
  3.6 流式细胞仪检测GL-AD-TRAIL引起的肿瘤细胞7404的凋亡第43-44页
 4 讨论第44-47页
参考文献第47-52页
致谢第52-53页

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