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木酮糖激酶对酿酒酵母代谢工程菌木糖利用的影响及木糖异构酶基因的胞外表达

目录第1-7页
摘要第7-10页
ABSTRACT第10-14页
本文缩写词表第14-15页
第一章 绪论第15-32页
 1.1 充分利用木质纤维素资源的重大意义第15-16页
 1.2 木质纤维素及其利用的研究现状第16-17页
 1.3 木糖的代谢第17-21页
  1.3.1 木糖代谢途径第17-18页
  1.3.2 发酵木糖的微生物第18-20页
  1.3.3 木糖代谢工程第20-21页
 1.4 酿酒酵母工程菌发酵木糖产乙醇的研究第21-27页
  1.4.1 木糖代谢途径在酿酒酵母中的建立第21-24页
  1.4.2 木糖代谢流下游的疏通第24-25页
  1.4.3 木糖的运输第25-26页
  1.4.4 辅酶工程在木糖代谢中的应用第26页
  1.4.5 其他与木质纤维材料全利用产乙醇的代谢途径改造第26-27页
 1.5 利用木糖的其他工程菌研究现状第27-28页
 1.6 酿酒酵母分泌蛋白以及酿酒酵母表面展示系统第28-30页
  1.6.1 酿酒酵母细胞表面蛋白第28-29页
  1.6.2 外源基因在酿酒酵母细胞表面的锚定表达策略第29页
  1.6.3 外源蛋白表达位置的检测第29-30页
  1.6.4 酿酒酵母表面展示系统的应用第30页
 1.7 展望第30页
 1.8 本文的研究工作第30-32页
第二章 超表达木酮糖激酶的酿酒酵母木糖代谢工程菌的构建及其代谢产物分析第32-52页
 2.1 导言第32页
 2.2 材料与方法第32-39页
  2.2.1 菌株和质粒第32页
  2.2.2 分子克隆用酶和试剂第32页
  2.2.3 培养基第32-34页
  2.2.4 微生物学技术第34页
  2.2.5 分子生物学方法第34-37页
  2.2.6 粗酶液的制备第37页
  2.2.7 酶活测定方法第37-38页
  2.2.8 蛋白质含量的测定第38页
  2.2.9 菌株平板生长试验第38页
  2.2.10 葡萄糖木糖共发酵试验第38-39页
  2.2.11 发酵生长曲线的测定第39页
  2.2.12 发酵产物分析第39页
 2.3 结果与讨论第39-51页
  2.3.1 超表达木酮糖激酶的重组质粒的构建第39-45页
  2.3.2 表达木糖代谢关键酶基因的重组菌株的构建第45-46页
  2.3.3 重组菌XK酶活性测定第46页
  2.3.4 重组菌株以木糖为唯一碳源的生长第46-47页
  2.3.5 木酮糖激酶对重组菌株在葡萄糖木糖共底物发酵中的影响第47-51页
 2.4 本章小结第51-52页
第三章 在酿酒酵母体外表达木糖异构酶第52-76页
 3.1 导言第52页
 3.2 材料与方法第52-56页
  3.2.1 菌株和质粒第52-54页
  3.2.2 分子克隆用酶和试剂第54页
  3.2.3 培养基及培养条件第54页
  3.2.4 微生物学技术第54页
  3.2.5 分子生物学方法第54-55页
  3.2.6 免疫荧光显微镜试验第55页
  3.2.7 粗酶液的制备第55页
  3.2.8 酶活测定方法第55页
  3.2.9 SDS-PAGE第55页
  3.2.10 菌株平板生长试验第55页
  3.2.11 重组菌EBY100/pYD-xy1A的木糖生长试验第55页
  3.2.12 底物产物分析第55-56页
 3.3 结果与讨论第56-75页
  3.3.1 a-型凝集素表面展示系统对XI的表面展示第56-61页
  3.3.2 alpha-凝集素表面展示系统对XI的表面展示第61-68页
  3.3.3 酿酒酵母分泌表达XI第68-75页
 3.4 本章小结第75-76页
第四章 嗜热细菌xy1A的分子改造以及纤维堆囊菌木糖异构酶基因的克隆第76-90页
 4.1 导言第76-77页
 4.2 材料与方法第77-79页
  4.2.1 菌株和质粒第77页
  4.2.2 分子克隆用酶和试剂第77页
  4.2.3 培养基及培养条件第77页
  4.2.4 微生物学技术第77页
  4.2.5 分子生物学方法第77-79页
  4.2.6 粗酶液的制备第79页
  4.2.7 酶活测定方法第79页
  4.2.8 蛋白质含量的测定第79页
 4.3 结果与讨论第79-89页
  4.3.1 嗜热细菌xy1A的分子改造第79-86页
  4.3.2 纤维堆囊菌木糖异构酶基因的克隆第86-89页
 4.4 本章小结第89-90页
全文总结第90-92页
参考文献第92-103页
致谢第103-104页
在读期间已发表或录用的论文第104页

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