| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 英文缩写符号及其中英文对照 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-34页 |
| ·HSP 的研究进展 | 第18-26页 |
| ·HSP 的结构特点 | 第19页 |
| ·热激反应的时间 | 第19-20页 |
| ·HSP 的功能 | 第20-24页 |
| ·HSP 具有分子伴侣作用 | 第20-21页 |
| ·HSP 与植物的耐热性 | 第21-22页 |
| ·HSP 与植物的抗冷性 | 第22-23页 |
| ·HSP 与植物的抗氧化能力 | 第23页 |
| ·HSP 在植物发育中的作用 | 第23-24页 |
| ·HSP 基因启动子结构特征 | 第24-25页 |
| ·HSP 基因的表达调控 | 第25-26页 |
| ·叶绿体小分子量 HSP | 第26-32页 |
| ·叶绿体sHSP 是sHSP 基因超家族的成员 | 第26-27页 |
| ·叶绿体sHSP 的结构 | 第27-29页 |
| ·叶绿体sHSP 与植物的耐热性 | 第29-30页 |
| ·叶绿体sHSP 与植物的耐冷性 | 第30-31页 |
| ·叶绿体sHSP 的分子伴侣功能 | 第31-32页 |
| ·本研究目的、意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-58页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·酶及生化试剂 | 第34页 |
| ·PCR 引物 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-58页 |
| ·利用 TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第35-36页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第36-37页 |
| ·目的基因全长cDNA 的分离 | 第37-43页 |
| ·中间片段的获得 | 第37-40页 |
| ·目的基因cDNA 3′端片段的分离(3′-RACE) | 第40-41页 |
| ·目的基因cDNA 5′端片段的分离(5′-RACE) | 第41-42页 |
| ·目的基因全长cDNA 的克隆 | 第42-43页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第43-46页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第43页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第43-44页 |
| ·转膜 | 第44页 |
| ·预杂交 | 第44-45页 |
| ·探针的制备 | 第45-46页 |
| ·杂交 | 第46页 |
| ·洗膜 | 第46页 |
| ·放射自显影 | 第46页 |
| ·Southern 杂交 | 第46-48页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·基因组 DNA 的限制性内切酶消化 | 第47页 |
| ·转膜 | 第47页 |
| ·探针合成 | 第47-48页 |
| ·预杂交、杂交及放射自显影 | 第48页 |
| ·RT-PCR 结合 Southern 杂交 | 第48-49页 |
| ·叶绿体 CaHSP26 基因正义表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·编码区cDNA 添加酶切位点 | 第49-50页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第50页 |
| ·酶切反应 | 第50页 |
| ·去磷酸化 | 第50页 |
| ·回收 | 第50页 |
| ·连接 | 第50-51页 |
| ·转化 | 第51页 |
| ·重组子的筛选 | 第51页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第51-53页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第51-52页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 检测 | 第53-54页 |
| ·CTAB 法微量法提取基因组 DNA | 第53页 |
| ·转基因植株的 PCR 筛选 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草生理指标的测定 | 第54-55页 |
| ·光合放氧量的测定 | 第54-55页 |
| ·叶绿素荧光参数测定 | 第55页 |
| ·P700 在 820 nm 光吸收 | 第55页 |
| ·扫描电镜样品的制作与观察 | 第55页 |
| ·小分子量热激蛋白的原核表达 | 第55-58页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第56页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌细胞活力实验 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-92页 |
| ·CaHSP26 的分离及其特征 | 第58-67页 |
| ·CaHSP26 中间片段的分离 | 第58-59页 |
| ·CaHSP26 基因全长的克隆 | 第59-62页 |
| ·CaHSP26 基因序列分析 | 第62-67页 |
| ·CaHSP26 表达产物二级结构预测 | 第62-64页 |
| ·基因序列同源性分析 | 第64-67页 |
| ·CaHSP26 在甜椒基因组中由单基因编码 | 第67-68页 |
| ·基因表达特性分析 | 第68-70页 |
| ·热激诱导 CaHSP26 的表达 | 第68页 |
| ·CaHSP26 在甜椒不同器官中的表达量不同 | 第68页 |
| ·CaHSP26 在甜椒器官中的表达受热激时间的影响 | 第68-69页 |
| ·CaHSP26 基因在甜椒热激后恢复过程中的表达 | 第69-70页 |
| ·低温对 CaHSP26 表达的影响 | 第70页 |
| ·异源表达 CaHSP26 基因提高大肠杆菌在高温和低温下的活力 | 第70-74页 |
| ·原核表达载体pET-CaHSP26 的构建 | 第70-71页 |
| ·转基因大肠杆菌的检测 | 第71-73页 |
| ·CaHSP26 的转入对大肠杆菌在适温(37℃)条件下的生长没有影响 | 第73-74页 |
| ·CaHSP26 基因表达提高大肠杆菌的耐热性 | 第74页 |
| ·低温条件下该基因的表达对大肠杆菌的保护作用 | 第74页 |
| ·CaHSP26 基因的表达减轻了烟草的光抑制 | 第74-82页 |
| ·正义表达载体 PBI-CaHSP26 的构建 | 第74-75页 |
| ·克隆载体的 PCR 检测 | 第75-76页 |
| ·表达载体的 PCR 检测 | 第76-77页 |
| ·甜椒 CaHSP26 基因转化烟草及转基因植株的分子检测 | 第77页 |
| ·甜椒 CaHSP26 基因在烟草中的表达 | 第77-79页 |
| ·高温和低温条件下转 CaHSP26 基因对烟草放氧活性的影响 | 第79页 |
| ·烟草中过量表达 CaHSP26 减轻 PSⅡ和 PSⅠ的光抑制 | 第79-80页 |
| ·过量表达 CaHSP26 对烟草叶片形态结构的影响 | 第80-82页 |
| ·甜椒细胞质小分子量热激蛋白基因(CaHSP18)的克隆及序列分析 | 第82-92页 |
| ·甜椒CaHSP18 基因的克隆 | 第82-84页 |
| ·CaHSP18 表达产物二级结构预测 | 第84-85页 |
| ·CaHSP18 同源性检索及其同源性分析 | 第85-87页 |
| ·氨基酸序列的系统进化分析 | 第87-88页 |
| ·甜椒 CaHSP18 属于一个多基因家族 | 第88-89页 |
| ·CaHSP18 基因在甜椒幼苗中的表达 | 第89页 |
| ·异源表达 CaHSP18 基因提高大肠杆菌中在高温和低温下的生存能力 | 第89-92页 |
| 4 讨论 | 第92-99页 |
| ·CaHSP26 和 CaHSP18 基因序列特征 | 第92-94页 |
| ·CaHSP26 和CaHSP18 与耐热性 | 第94-96页 |
| ·CaHSP26 和CaHSP18 与耐冷性 | 第96-97页 |
| ·热激蛋白与植物的光破坏防御机制 | 第97页 |
| ·下一步工作设想 | 第97-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-113页 |
| 附录1 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读学位期间已发表和待发表的论文 | 第116页 |
