| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一篇：论文综述部分 | 第8-33页 |
| 第一部分：β-1，4-半乳糖基转移酶的研究进展 | 第8-14页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 1、β-1，4-半乳糖基转移酶家族的发现与克隆 | 第10页 |
| 2、两类β-1，4-半乳糖基转移酶的区别 | 第10-11页 |
| 3、β-1，4-半乳糖基转移酶的蛋白分子结构 | 第11-12页 |
| 4、β-1，4-半乳糖基转移酶的生物学功能 | 第12-13页 |
| 参考文献 | 第13-14页 |
| 第二部分：毕赤酵母外源基因表达系统的应用及研究进展 | 第14-33页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 1、毕赤酵母表达宿主菌 | 第16-18页 |
| 2、毕赤酵母表达载体 | 第18-21页 |
| 3、重组表达载体与毕赤酵母的转化及整合 | 第21-23页 |
| 4、外源蛋白在其中的表达 | 第23-25页 |
| 5、毕赤酵母表达系统与大肠杆菌表达系统的比较 | 第25-28页 |
| 6、毕赤酵母表达系统的应用及研究进展 | 第28-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二篇：论文实验部分 β-1，4-半乳糖基转移酶在毕赤酵母中的克隆、表达及其活性的研究 | 第33-67页 |
| 前言 | 第34-35页 |
| 实验流程图： | 第35-36页 |
| 1.实验材料和仪器 | 第36-42页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·质粒 | 第36页 |
| ·酶及蛋白制剂 | 第36页 |
| ·各种试剂盒 | 第36-37页 |
| ·其他试剂 | 第37页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第37-39页 |
| ·培养液和固体培养基 | 第39-40页 |
| ·各种电泳胶的制备 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.实验方法 | 第42-51页 |
| ·引物的设计与合成 | 第42页 |
| ·β-1，4-GT基因克隆片段的制备 | 第42页 |
| ·改造后的β-1，4-GT基因片段的回收 | 第42-43页 |
| ·pUCm-GT的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·测序及序列分析 | 第44页 |
| ·pPIC9K-GT表达质粒的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| ·pPIC9K-GT表达工程菌的制备 | 第45-47页 |
| ·Mut~+表型重组酵母的诱导表达实验 | 第47-48页 |
| ·β-1，4-GT的纯化 | 第48-49页 |
| ·β-1，4-GT的活性测定 | 第49-50页 |
| ·胞外分泌及胞内保留的β-1，4-GT的酶活比较 | 第50-51页 |
| 3.实验结果 | 第51-64页 |
| ·β-1，4-GT基因的改造和克隆 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆的筛选及酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·Fe-SOD基因的序列及分析 | 第53-54页 |
| ·pPIC9K-GT质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·pPIC9K-GT基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第55-57页 |
| ·β-1，4-GT的纯化 | 第57-58页 |
| ·β-1，4-GT的活性测定 | 第58-60页 |
| ·胞外分泌及胞内保留的β-1，4-GT的活性比较 | 第60-64页 |
| 4.讨论 | 第64-66页 |
| ·重组质粒pPIC9K-GT线性化原因 | 第64页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化方法的选择 | 第64页 |
| ·表达系统的选择 | 第64-65页 |
| ·毕赤酵母发酵培养基的选择 | 第65页 |
| ·活性测定 | 第65-66页 |
| 5.总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 附录一：(英文缩写词表) | 第69-70页 |
| 附录二：(质粒pPIC9K图谱) | 第70-71页 |
| 附录三：碱提取质粒方法 | 第71-72页 |
| 附录四：LiCl转化法 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
