| 引 言 | 第1-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-33页 |
| ·蛋白质化学修饰 | 第13-23页 |
| ·化学修饰的意义 | 第13-14页 |
| ·蛋白质化学修饰基本思路 | 第14-16页 |
| ·修饰剂的选择 | 第14-15页 |
| ·蛋白质性质的了解 | 第15页 |
| ·反应条件的选择 | 第15-16页 |
| ·化学修饰对蛋白质性质的影响 | 第16-18页 |
| ·增强蛋白质的天然构象的稳定性和耐热性的作用 | 第16页 |
| ·保护蛋白质活性部位和抗抑制剂的作用 | 第16-17页 |
| ·维持蛋白质功能结构的完整性与抗蛋白水解酶的作用 | 第17页 |
| ·消除蛋白的抗原性以及稳定蛋白质的微环境 | 第17-18页 |
| ·常见的蛋白质化学修饰方法 | 第18-22页 |
| ·天然高分子的化学偶联 | 第19-20页 |
| ·用蛋白质对蛋白质进行化学修饰 | 第20-21页 |
| ·蛋白质主链结构的化学修饰 | 第21页 |
| ·定点突变与化学修饰相结合的方法 | 第21-22页 |
| ·人工合成高分子的化学偶联 | 第22页 |
| ·蛋白质化学修饰的展望 | 第22-23页 |
| ·聚乙二醇偶联 | 第23-28页 |
| ·PEG的性质 | 第23-24页 |
| ·PEG在生化药物化学修饰中的应用 | 第24-25页 |
| ·聚乙二醇的活化 | 第25-27页 |
| ·PEG修饰蛋白的产物分析 | 第27-28页 |
| ·人粒细胞集落刺激因子简介 | 第28-33页 |
| ·G-CSF的分子结构和基因 | 第29-30页 |
| ·G-CSF的生物学作用 | 第30-31页 |
| ·G-CSF的临床用途 | 第31-33页 |
| 2 聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的修饰条件优化 | 第33-48页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·实验材料与设备 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·设备 | 第33-34页 |
| ·羧甲基化单甲氧基聚乙二醇的制备及活化 | 第34-35页 |
| ·PEG活化率的测定 | 第35-36页 |
| ·标准曲线的制作 | 第35页 |
| ·实际样品的测定 | 第35-36页 |
| ·偶联物的制备 | 第36页 |
| ·修饰条件优化 | 第36页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第36-37页 |
| ·基本原理 | 第36-37页 |
| ·步骤 | 第37页 |
| ·蛋白质氨基修饰度的测定 | 第37-38页 |
| ·基本原理 | 第37-38页 |
| ·步骤 | 第38页 |
| ·生物活性测定 | 第38-40页 |
| ·基本原理 | 第39页 |
| ·G-CSF测活用溶液配制 | 第39页 |
| ·G-CSF国家标准品标定方法 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·活化度测定标准曲线及结果 | 第40-41页 |
| ·正交试验结果 | 第41-44页 |
| ·不同因素对产物平均修饰度和生物活性的影响 | 第44-46页 |
| ·缓冲液pH值 | 第44-45页 |
| ·修饰剂与蛋白质摩尔配比 | 第45页 |
| ·溶液离子类型 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 3 聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的修饰产物分离纯化 | 第48-57页 |
| ·材料和方法 | 第48-51页 |
| ·实验材料与设备 | 第48页 |
| ·PEG修饰G-CSF | 第48页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第48-49页 |
| ·修饰产物分离纯化 | 第49页 |
| ·SephadexG-25脱除小分子 | 第49页 |
| ·阳离子交换色谱分离G-CSF和PEG-G-CSF | 第49页 |
| ·阴离子交换色谱分离各修饰组分并除去PEG | 第49页 |
| ·偶联物的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第49-51页 |
| ·电泳溶液配制 | 第49-50页 |
| ·银染液配制 | 第50页 |
| ·实验步骤 | 第50-51页 |
| ·偶联物的生物活性鉴定 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-55页 |
| ·修饰产物分离纯化色谱图 | 第51-54页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定各收集峰 | 第54页 |
| ·各收集峰的生物活性鉴定 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 4 聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的产物分析 | 第57-64页 |
| ·材料和方法 | 第57-60页 |
| ·实验材料与设备 | 第57页 |
| ·荧光胺法测定蛋白修饰度 | 第57页 |
| ·TNBS法测定蛋白修饰度 | 第57-60页 |
| ·反应原理 | 第57-58页 |
| ·反应步骤 | 第58页 |
| ·TNBS 反应时间进程曲线 | 第58-59页 |
| ·甘氨酸标准曲线 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第60页 |
| ·MALDI-TOF MS测定分子量 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-62页 |
| ·不同方法测定修饰度结果比较 | 第60-61页 |
| ·MALDI-TOF MS图谱 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-64页 |
| 5 PEG-G-CSFS偶联物的稳定性 | 第64-68页 |
| ·材料与方法 | 第64-65页 |
| ·实验材料与设备 | 第64页 |
| ·PEG-G-CSF偶联物的热稳定性 | 第64页 |
| ·PEG-G-CSF偶联物的抗胰酶水解能力 | 第64页 |
| ·PEG-G-CSF偶联物的保存稳定性 | 第64-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-67页 |
| ·热稳定性 | 第65-66页 |
| ·抗胰酶水解能力 | 第66页 |
| ·PEG-G-CSF偶联物的保存稳定性 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 6 结论与展望 | 第68-71页 |
| ·研究总结 | 第68-69页 |
| ·工作展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第79-80页 |
| 致 谢 | 第80页 |