ABSTRACT | 第1-3页 |
摘要 | 第3-4页 |
致谢 | 第4-5页 |
缩略词表 | 第5-6页 |
目录 | 第6-8页 |
前言 | 第8-10页 |
材料与方法 | 第10-27页 |
·材料 | 第10-15页 |
·质粒、菌株和细胞 | 第10页 |
·分子生物学工具酶及其它产品 | 第10页 |
·基因 | 第10-11页 |
·引物合成及测序 | 第11-13页 |
·细胞培养用品 | 第13-14页 |
·蛋白质纯化、免疫共沉淀试剂、免疫试剂 | 第14页 |
·其它试剂 | 第14页 |
·主要仪器设备 | 第14-15页 |
·实验动物 | 第15页 |
·放射性同位素 | 第15页 |
·实验方法 | 第15-27页 |
·PCR扩增 | 第15-17页 |
·目的基因真核表达载体和原核表达载体的构建 | 第17-19页 |
·DNA纯化和质粒提取 | 第19-20页 |
·GST融合蛋白在大肠杆菌JM109中的诱导表达和纯化 | 第20-21页 |
·兔抗hPLIC-2多克隆抗体的制备 | 第21页 |
·细胞培养和细胞转染 | 第21-23页 |
·免疫沉淀(immunoprecipitation,IP) | 第23-24页 |
·GST融合蛋白体外相互作用实验 | 第24页 |
·免疫印迹(imunnityblotIB;WesternBlot,WB) | 第24-25页 |
·体外直接相互作用研究(Far-Westernblot) | 第25页 |
·蛋白质浓度的测定 | 第25页 |
·SiRNA(hPLIC-2)稳定表达细胞的建立 | 第25-26页 |
·GFP和RFP融合蛋白表达的观察 | 第26页 |
·酪氨酸磷酸化体外激酶分析 | 第26-27页 |
结果 | 第27-46页 |
·抗hPLIC-2多克隆抗体的制备 | 第27-30页 |
·GST-hPLIC-2的表达与纯化 | 第27-29页 |
·hPLIC-2多克隆抗体的制备和鉴定 | 第29-30页 |
·SiRNA抑制hPLIC-2表达的稳定细胞的建立 | 第30-32页 |
·c-Abl与hPLIC-2相互作用的研究 | 第32-38页 |
·c-Abl与hPLIC-2在细胞内形成复合体 | 第32-33页 |
·c-Abl与hPLIC-2载体外直接相互作用 | 第33页 |
·hPLIC-2与c-Abl相互作用的结构域 | 第33-36页 |
·氧化应激促进c-Abl与hPLIC-2之间的相互作用 | 第36页 |
·Arg与hPLIC-2相互作用 | 第36-38页 |
·c-Abl促进hPLIC-2与蛋白酶体亚基的结合 | 第38-39页 |
·c-Abl与hPLIC-2相互作用对蛋白质泛素化的影响 | 第39-44页 |
·hPLIC-2与泛素化蛋白结合研究 | 第39-41页 |
·c-Abl与hPLIC-2影响细胞内总蛋白质泛素化水平 | 第41-42页 |
·c-Abl影响hPLIC-2与泛素化蛋白的结合 | 第42-44页 |
·c-Abl对hPLIC-2酪氨酸磷酸化作用研究 | 第44-46页 |
讨论 | 第46-49页 |
·兔抗hPLIC-2多克隆抗体的制备 | 第46页 |
·hPLIC-2表达抑制细胞系的建立 | 第46-47页 |
·hPLIC-2与c-Abl的相互作用 | 第47页 |
·c-Abl通过hPLIC-2调节泛素化蛋白降解 | 第47-49页 |
总结与展望 | 第49-51页 |
参考文献 | 第51-54页 |
综述1 | 第54-62页 |
综述2 | 第62-68页 |
附录1 | 第68-79页 |
附录2 | 第79-86页 |