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O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制

第一章 序言第1-21页
   ·研究背景第12-13页
   ·国内外研究现状第13-19页
     ·口蹄疫基因疫苗的构成第13-14页
     ·口蹄疫基因疫苗的免疫机理第14-15页
     ·口蹄疫基因疫苗的不同免疫形式第15-17页
     ·免疫佐剂在口蹄疫基因疫苗研究中的应用第17-19页
   ·研究目的及意义第19-21页
第二章 口蹄疫病毒China99株真核表达质粒的构建第21-32页
   ·材料与方法第22-28页
     ·菌株与质粒第22页
     ·主要试剂第22页
     ·主要仪器第22页
     ·FMDV China99株P12X基因(片段Ⅰ)的PCR扩增第22-23页
     ·FMDV China99株P1'2X3C基因(片段Ⅱ)的PCR扩增第23页
     ·P12X3C基因(片段Ⅲ)的PCR扩增第23页
     ·FMDV China99株P12X3C基因的PCR扩增第23-25页
     ·FMDV China99株3D基因的PCR扩增第25页
     ·P12X3C3D基因的PCR扩增第25页
     ·重组质粒的构建、克隆及检测第25-28页
   ·结果第28-30页
     ·片段Ⅰ、片段Ⅱ和片段Ⅲ的扩增及鉴定第28页
     ·P12X3C、3D、P12X3C3D基因片段的扩增及鉴定第28页
     ·重组质粒的构建、克隆及鉴定第28-30页
     ·P12X3C3D基因的序列测定及分析第30页
   ·讨论第30-32页
第三章 口蹄疫病毒多基因重组质粒在BHK-21细胞中的表达第32-39页
   ·材料与方法第32-33页
     ·主要材料第32-33页
     ·重组质粒的纯化回收第33页
     ·BHK-21细胞的转染第33页
     ·间接免疫荧光检测第33页
     ·双抗体夹心ELISA检测第33页
     ·病毒空衣壳的电镜观察第33页
   ·结果第33-36页
     ·夹心ELISA的检测结果第33-35页
     ·间接免疫荧光检测结果第35-36页
     ·口蹄疫病毒空衣壳的电镜观察第36页
   ·讨论第36-39页
第四章 节口蹄疫裸基因疫苗对豚鼠的免疫效果研究第39-47页
   ·材料与方法第39-42页
     ·质粒、病毒、实验动物第39-40页
     ·主要试剂第40页
     ·质粒大量提取第40页
     ·实验动物免疫第40-41页
     ·FMOV特异抗体检测第41页
     ·血清中和抗体的检测第41页
     ·豚鼠T淋巴细胞增殖试验第41-42页
     ·攻毒试验第42页
   ·结果第42-44页
     ·FMOV特异抗体水平的动态变化第42页
     ·血清中和抗体水平第42-44页
     ·T淋巴细胞增殖试验第44页
     ·攻毒试验第44页
   ·讨论第44-47页
第五章 口蹄疫基因苗多质粒混合免疫方式对豚鼠的免疫效果研究第47-54页
   ·材料与方法第47-50页
     ·质粒、病毒、实验动物第47-48页
     ·主要试剂第48页
     ·真核表达质粒pcDNA3.1/IFN的构建第48-49页
     ·脂质体的制备第49页
     ·质粒及脂质体-质粒混合液的制备第49页
     ·实验动物免疫第49页
     ·FMDV特异抗体的检测第49-50页
     ·豚鼠T淋巴细胞增殖试验第50页
     ·攻毒试验第50页
   ·结果第50-52页
     ·真核表达质粒pcDNA3.1/IFN的构建第50页
     ·脂质体形态观察第50-51页
     ·FMDV特异抗体水平的动态变化第51-52页
     ·T淋巴细胞增殖试验第52页
     ·攻毒试验第52页
   ·讨论第52-54页
第六章 口蹄疫基因疫苗对牛的免疫效果研究第54-59页
   ·材料与方法第54-56页
     ·质粒、病毒、实验动物第54-55页
     ·主要试剂第55页
     ·脂质体的制备第55页
     ·质粒及脂质体-质粒混合液的制备第55页
     ·实验动物免疫第55页
     ·FMOV特异抗体的检测第55页
     ·周血淋巴细胞增殖试验第55-56页
     ·试验第56页
   ·结果第56-57页
     ·DV特异抗体水平第56页
     ·淋巴细胞增殖试验第56-57页
     ·毒试验第57页
   ·讨论第57-59页
第七章 结论第59-60页
第八章 文献综述第60-77页
   ·基因疫苗的免疫机理第60-61页
     ·一般特点第60页
     ·肌肉注射及皮内基因枪接种基因疫苗的免疫机理第60-61页
   ·基因疫苗免疫接种途径及方式第61-64页
     ·免疫途径第61-63页
     ·接种方式第63-64页
   ·免疫佐剂在基因疫苗研究中的应用第64-74页
     ·细胞因子第65-67页
     ·CpG DNA第67-69页
     ·化学佐剂第69-72页
     ·共刺激信号分子第72页
     ·化学因子第72页
     ·黏附分子第72-73页
     ·弱化细菌体第73页
     ·病毒载体第73-74页
   ·基因疫苗研究新进展第74-76页
     ·基因组免疫(genomic immunization)或表达库免疫(expression library immunization,ELI)第74页
     ·基因免疫毒素(genetic immunotoxin)第74页
     ·mRNA基因免疫第74-75页
     ·基因疫苗靶向细胞腔或细胞表面(Targeting DNA vaccine to cellular compartment or the cell surface)第75页
     ·嵌合抗原DNA(DNA for chimeric antigens)第75-76页
     ·DNA初免-蛋白/病毒加强免疫(DNA prime-protein/viral boost immunization)第76页
   ·基因疫苗的应用前景第76-77页
参考文献第77-90页
致谢第90-91页
附录第91-103页
作者简历第103页

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