A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在E.coli中的表达
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第8-10页 |
| 2 文献综述 | 第10-22页 |
| 3 材料与仪器 | 第22-24页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·口蹄疫病毒株、细菌菌株及质粒载体 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·酶和生物学试剂 | 第22页 |
| ·引物 | 第22-23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| 4 方法与步骤 | 第24-35页 |
| ·口蹄疫病毒的处理 | 第24页 |
| ·病毒RNA提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-26页 |
| ·反转录合成cDNA | 第24-25页 |
| ·cDNA扩增 | 第25页 |
| ·扩增目的DNA片段的纯化与回收 | 第25-26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·PCR产物与pGEM T Easy载体的连接 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·挑选与鉴定阳性克隆菌落 | 第28-29页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因的核苷酸序列测定 | 第29页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第29-31页 |
| ·表达引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达产物的检测 | 第31-33页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第31-33页 |
| ·Western-blot分析 | 第33页 |
| ·包涵体的提取 | 第33-35页 |
| ·溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·包涵体的提取 | 第34页 |
| ·包涵体蛋白的处理 | 第34-35页 |
| 5 结果 | 第35-40页 |
| ·RT-PCR产物的电泳结果 | 第35页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的电泳、PCR及酶切鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第35页 |
| ·重组表达载体的构建和鉴定 | 第35页 |
| ·表达产物的检测 | 第35-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| ·Western blotting分析 | 第36-40页 |
| 6 讨论 | 第40-44页 |
| ·序列分析 | 第40-41页 |
| ·GST融合表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·VP1基因的表达和检测 | 第42-43页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第43-44页 |
| 7 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致 谢 | 第49页 |
