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家蚕质多角体病毒RDRP的基因克隆、表达及定位研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-12页
缩略词第12-14页
前言第14-17页
第1章 家蚕质多角体病毒RDRP 基因的序列测定第17-43页
   ·材料第17-19页
     ·BmCPV(C)病毒多角体的繁殖与纯化第17页
     ·质粒和菌株第17-18页
     ·缓冲液第18-19页
     ·培养基第19页
     ·限制性内切酶及其它工具酶第19页
     ·试剂盒第19页
   ·方法第19-24页
     ·BmCPV(C)总dsRNA 的提取第19-20页
     ·BmCPV(C)的RDRP 基因RT-PCR第20-21页
     ·PCR 产物与pMD18-T 载体连接第21-22页
     ·TG1 感受态细胞的制备第22页
     ·质粒DNA 的转化第22页
     ·质粒DNA 的纯化第22-23页
     ·质粒DNA的鉴定第23-24页
     ·BmCPV(C)的RDRP 基因ORF 序列测定第24页
     ·BmCPV(C)的RDRP 基因ORF 序列及同源性分析第24页
   ·结果与分析第24-38页
     ·BmCPV(C)的RDRP 基因RT-PCR第24-25页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因 PCR 产物的克隆和重组质粒的酶切鉴定第25-26页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因的测序及序列分析第26-33页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因的同源性比较及分子进化分析第33-35页
     ·质多角体病毒 RDRP 基因的保守序列分析第35-38页
   ·小结第38-39页
   ·讨论第39-43页
     ·RT-PCR第39-40页
     ·质多角体病毒 RDRP 核苷酸和氨基酸同源性分析第40-43页
第2章 BmCPV(C) RDRP 基因在原核系统中的表达第43-68页
   ·材料第43-46页
     ·质粒和菌株第43-44页
     ·培养基第44页
     ·缓冲液第44-45页
     ·工具酶及相关试剂第45-46页
     ·试剂盒第46页
   ·方法第46-51页
     ·BmCPV(C)的 RDRP 表达引物的设计第46页
     ·BmCPV(C)的 RDRP 逆转录反应第46页
     ·PCR 扩增双链 DNA第46页
     ·PCR 产物的回收纯化第46-47页
     ·PCR 产物与pMD18-T 载体连接第47页
     ·TG1 感受态细胞的制备第47页
     ·质粒DNA的转化第47页
     ·质粒DNA 的Kit 提取及纯化第47页
     ·质粒DNA的酶切第47-48页
     ·BmCPV(C)的RDRP 基因的拼接第48-49页
     ·DE3感受态细胞的制备第49页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因在大肠杆菌中的表达第49-50页
     ·表达产物的检测第50页
     ·透射电镜的观察第50页
     ·融合蛋白的可溶性鉴定第50-51页
     ·抗血清的制备及检测第51页
   ·结果第51-64页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因引物设计第51-56页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因的分段逆转录及PCR 扩增第56-57页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因的分段酶切鉴定第57-58页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因的拼接及鉴定第58-59页
     ·pET286-RDRP 表达载体的构建第59页
     ·BmCPV(C) RDRP 基因在大肠杆菌中的表达第59-61页
     ·透射电镜的观察第61-62页
     ·融合蛋白的可溶性鉴定第62-63页
     ·BmCPV(C)-RDRP 抗体的制备及检测第63-64页
   ·小结第64-65页
   ·讨论第65-68页
     ·表达载体的构建第65页
     ·重组蛋白的诱导表达第65-68页
第3章 BmCPV(C) RDRP 的免疫电镜定位研究第68-82页
   ·材料第68-70页
     ·实验材料第68页
     ·试剂第68-69页
     ·仪器第69-70页
   ·方法第70-72页
     ·BmCPV(C)病毒多角体的扫描电镜观察第70页
     ·BmCPV(C)病毒粒子的电镜负染色观察第70页
     ·免疫电镜样品制备第70-71页
     ·免疫标记第71-72页
     ·透射电镜定位观察第72页
   ·结果第72-77页
     ·BmCPV(C)病毒多角体的扫描观察第72-73页
     ·BmCPV(C)病毒粒子的电镜负染色观察第73-74页
     ·BmCPV(C) RDRP 蛋白的定位第74-77页
   ·小结第77-78页
   ·讨论第78-82页
     ·免疫电镜样品制备第78-79页
     ·胶体金标记率分析第79-80页
     ·抗体的处理和纯化第80-81页
     ·免疫电镜定位第81-82页
全文结论第82-83页
第4章 昆虫质多角体病毒的研究进展第83-100页
参考文献第100-116页
致谢第116-117页
原创性声明第117页

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