| 原创性声明 | 第1-4页 |
| 目录 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 一.肿瘤多药耐药的国内外研究现状 | 第15-22页 |
| 1.肿瘤多药耐药的产生原因 | 第15-17页 |
| 2.逆转肿瘤MDR的策略 | 第17-18页 |
| 3.MDR的基因治疗 | 第18-20页 |
| 4.参考文献 | 第20-22页 |
| 二.本研究的总体方案 | 第22-25页 |
| 1.反义寡核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药 | 第23页 |
| 2.反义核酶逆转乳腺癌细胞多药耐药 | 第23-24页 |
| 3.本研究的特色之处 | 第24-25页 |
| 第一部分 反义寡核苷酸逆转乳腺癌多药耐药的研究 | 第25-44页 |
| 一.反义寡核苷酸封闭mdr1上游转录调节区对肿瘤细胞多药耐药的逆转 | 第25-35页 |
| 材料和方法 | 第26-31页 |
| 1.材料 | 第26-27页 |
| 2.仪器 | 第27-28页 |
| 3.方法 | 第28-31页 |
| ·MTT法 | 第28页 |
| ·ASODN和脂质体的直接细胞毒性测定 | 第28页 |
| ·ASODN结合脂质体后的细胞毒性测定 | 第28页 |
| ·脂质体介导ASODN转染实验细胞 | 第28-29页 |
| ·细胞总RNA抽提 | 第29页 |
| ·逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mdr 1 mRNA | 第29-30页 |
| ·免疫组织化学检测细胞p-gp | 第30-31页 |
| ·罗丹明外排实验 | 第31页 |
| ·ASODN的耐药逆转效果 | 第31页 |
| 4.统计方法 | 第31页 |
| 结果 | 第31-34页 |
| 1.各组ASODN和脂质体的直接细胞毒性作用 | 第31-32页 |
| 2.各组ASODN对实验细胞MDR的逆转作用 | 第32-34页 |
| ·实验细胞mdr-1mRNA的变化 | 第32页 |
| ·实验细胞P-gp表达的变化 | 第32-33页 |
| ·实验细胞P-gp转运功能的变化 | 第33页 |
| ·各组ASODN的耐药逆转效果 | 第33-34页 |
| 讨论 | 第34-35页 |
| 二.逆转肿瘤MDR的最佳ASODN片段的筛选 | 第35-39页 |
| 材料与方法 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-38页 |
| 1.各组ASODN和脂质体的直接细胞毒性作用 | 第36页 |
| 2.各组ASODN对肿瘤细胞MDR的逆转作用 | 第36-38页 |
| ·各组ASODN处理的实验细胞mdr-1 mRNA的变化 | 第36页 |
| ·各组实验细胞P-gp蛋白表达阳性率 | 第36-37页 |
| ·实验细胞P-gp转运功能的变化 | 第37页 |
| ·各组ASODN的耐药逆转效果 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-39页 |
| 三.不同浓度ASODN转染肿瘤细胞后的动态观察 | 第39-42页 |
| 材料与方法 | 第39页 |
| 结果 | 第39-41页 |
| 1.不同作用浓度ASODN和脂质体的直接细胞毒性作用 | 第39-40页 |
| 2.不同浓度封闭S区的ASODN对肿瘤细胞MDR的逆转作用 | 第40-41页 |
| ·实验细胞mdr-1mRNA的变化 | 第40页 |
| ·实验细胞P-gp表达的变化 | 第40页 |
| ·实验细胞P-gp转运功能的变化 | 第40页 |
| ·ASODN的耐药逆转效果 | 第40-41页 |
| 讨论 | 第41-42页 |
| 第一部分参考文献 | 第42-44页 |
| 第二部分 反义核酶逆转肿瘤细胞MDR的研究 | 第44-58页 |
| 材料与方法 | 第46-51页 |
| 1.材料 | 第46-47页 |
| 2.仪器 | 第47页 |
| 3.方法 | 第47-51页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·核酶基因的合成 | 第47页 |
| ·pEGFP为报告基因的核酶表达质粒的构建 | 第47-50页 |
| ·pEGFP-C1的限制性酶切 | 第47-48页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第48页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第48页 |
| ·转化 | 第48-49页 |
| ·含目的基因阳性重组子的鉴定及大量扩增 | 第49-50页 |
| ·脂质体Lipofectin 2000介导核酶表达质粒转染耐药肿瘤细胞 | 第50页 |
| ·计算细胞转染率 | 第50页 |
| ·转染细胞的筛选 | 第50-51页 |
| ·GFP表达的观察 | 第51页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第51页 |
| ·RT-PCR检测细胞的mdr 1 mRNA | 第51页 |
| ·流式细胞术检测细胞p-gp阳性率 | 第51页 |
| ·罗丹明123(Rh123)外排实验检测P-gp的转运功能 | 第51页 |
| ·耐药逆转效果 | 第51页 |
| ·统计方法 | 第51页 |
| 结果 | 第51-53页 |
| 1.重组质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| 2.实验细胞GFP表达情况 | 第51页 |
| 3.实验细胞mdr1 mRNA变化 | 第51-52页 |
| 4.实验细胞p-gp表达的变化 | 第52页 |
| 5.P-gp转运功能的变化 | 第52页 |
| 6.实验细胞的耐药逆转效果 | 第52页 |
| 7.G418筛选完成2月后，实验细胞MDR的逆转情况 | 第52页 |
| 8.核酶与ASODN逆转乳腺癌细胞MDR的对比 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 第二部分参考文献 | 第56-58页 |
| 附图 | 第58-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 发表论文、获奖及参加科研课题情况 | 第70-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
