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中国猪戊型肝炎(HE)的分布及HEV ORF2片段的基因克隆与原核表达载体的构建

一. 英文缩略表第1-8页
二. 中文摘要第8-10页
三. 英文摘要第10-13页
四. 引言第13-21页
 1 病原学第13-15页
 2 流行病学第15-16页
 3 临床症状和病理变化第16-17页
 4 诊断第17-19页
   ·、酶联免疫吸附实验(ELISA)第17页
   ·、PCR方法第17-18页
   ·、血清中和实验第18页
   ·、免疫荧光试验(IFA)第18页
   ·、免疫印迹(工B)第18页
   ·、免疫电镜(IEM)第18-19页
 5 疫苗第19-21页
五. 实验研究第21-57页
 实验一  中国不同地区不同月龄猪中戊型肝炎病毒感染情况的调查与分析第21-29页
  1 材料与方法第22-24页
   ·研究对象第22页
   ·样品的处理第22页
   ·抗--HEV抗体的检测第22-24页
  2 结  果第24-26页
   ·不同地区猪场血清抗体检查结果第24-25页
   ·不同猪场血清抗体检查结果第25页
   ·不同月龄猪HEV抗体阳性率第25-26页
  3 讨  论第26-29页
 实验二:HEV ORF2基因片断的克隆与原核表达载体的构建第29-57页
  1 材料与方法第30-39页
   ·试剂及仪器第30-31页
     ·试剂第30-31页
     ·仪器第31页
   ·溶液配制第31-32页
   ·引物设计与合成第32页
   ·病毒的处理与RNA的提取第32-33页
   ·RT-PCR以及巢式PCR第33-34页
   ·PCR产物的纯化和克隆第34-37页
     ·PCR产物的纯化第34-35页
     ·PCR产物的克隆第35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第35-36页
     ·PCR产物的转化第36页
     ·碱法少量提取质粒DNA第36-37页
     ·阳性克隆的筛选与鉴定第37页
   ·克隆基因的序列分析第37页
   ·原核表达载体的构建第37-39页
     ·酶切重组质粒PGEM-ItEV和PET一30a(+)第38页
     ·回收胶的步骤第38-39页
     ·表达质粒与目的基因的连接第39页
  2 结果第39-53页
   ·HEV ORF2部分基因的PCR扩增和克隆结果第40页
   ·PGEM-HEV序列的测定与分析第40-52页
   ·重组质粒PEl-HEV的PCR鉴定第52-53页
   ·构建后的PEI-HEV的测定与分析第53页
  3 讨论第53-57页
六. 结论第57-58页
七. 参考文献第58-69页
八. 附录第69-71页
九. 致谢第71-72页
十. 攻读学位期间发表的论文情况第72页

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