| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 文献综述: 鉴定病毒受体的研究方法 | 第11-21页 |
| 1 病毒铺覆蛋白印迹技术(VIRUS OVERLAY PROTEIN BLOT ASSAY, VOPBA) | 第12页 |
| 2 噬菌体展示(PHAGE DISPLAY)技术 | 第12-14页 |
| 3 酵母双杂交系统(YEAST Two-HYBRID SYSTEMS) | 第14-18页 |
| ·酵母双杂交系统的构建原理及应用 | 第14-16页 |
| ·酵母双杂交系统的发展 | 第16-18页 |
| 4 蛋白质芯片(PROTEINCHIP) | 第18-21页 |
| 第一章 中国明对虾(FENNEROPENAEUS CHINENSIS)鳃细胞全长CDNA文库的构建 | 第21-36页 |
| 1 材料与方法 | 第21-30页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·对虾鳃组织总RNA的提取和检测 | 第23-25页 |
| ·长距离PCR(LD-PCR)扩增dsDNA | 第25-26页 |
| ·dsDNA产物的纯化 | 第26页 |
| ·AH109感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·dsDNA、pGADT7-Rec载体质粒，共转化酵母菌株AH109 | 第27-28页 |
| ·在SD／-Leu平板上培养及收获转化子克隆 | 第28页 |
| ·文库的鉴定 | 第28-30页 |
| 2 结果 | 第30-33页 |
| ·中国明对虾总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·cDNA的合成及纯化 | 第31-32页 |
| ·cDNA文库的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-36页 |
| 第二章 AH109[PGBKT7-VP281]、AH109[PGBKT7-VP28]菌株的构建 | 第36-61页 |
| 第一节 VP281、VP28基因的克隆 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·模板的准备 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的检测与定量 | 第37页 |
| ·PCR产物的纯化与定量 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-42页 |
| ·引物设计 | 第37-41页 |
| ·扩增结果 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 第二节 PGBKT7-VP281、PGBKT7-VP28重组质粒的构建与扩增 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-50页 |
| ·VP281、VP28 PCR产物的酶切 | 第45页 |
| ·酶切产物的纯化定量 | 第45页 |
| ·pGBKT7载体质粒的酶切、纯化、定量 | 第45-46页 |
| ·线性质粒的去磷酸化 | 第46页 |
| ·去磷酸化后的纯化定量 | 第46页 |
| ·VP281、VP28分别与线性pGBKT7连接 | 第46-47页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·连接产物的转化 | 第47-48页 |
| ·重组克隆的菌落PCR检测 | 第48页 |
| ·重组质粒的提取 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的定量 | 第49页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·重组片段的测序 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-51页 |
| ·pGBKT7-VP281菌落PCR | 第50页 |
| ·pGBKT7-VP281的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·pGBKT7-VP28菌落PCR | 第51页 |
| ·pGBKT7-VP28的酶切鉴定 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三节 PGBKT7-VP28、PGBKT7-VP28的酵母转化及活性检测 | 第53-61页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| ·AH109、Y187基因性及表现型 | 第53页 |
| ·AH109、Y187报告基因设置 | 第53-54页 |
| ·重组质粒转化酵母菌 | 第54-57页 |
| 2 结果 | 第57-59页 |
| ·Y187[pGBKT7]平板的转化效率 | 第57页 |
| ·DNA-BD融合蛋白的自激作用检测 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第三章 AH109[LIBRARY]与Y187[PGBKT7-VP28]的融合及阳性克隆的鉴定 | 第61-77页 |
| 第一节 AH109[LIBRARY]与Y187[PGBKT7-VP28]的融合与选择性培养 | 第61-69页 |
| 1 材料与方法 | 第61-66页 |
| ·培养基的准备 | 第61页 |
| ·AH109[Library]与Y187[pGBKT7-VP28]融合 | 第61-62页 |
| ·选择性培养基筛选 | 第62-64页 |
| ·融合对照的建立 | 第64-66页 |
| 2 结果 | 第66-68页 |
| ·融合过程观察 | 第66-67页 |
| ·融合效率 | 第67页 |
| ·得到的阳性克隆情况 | 第67-68页 |
| ·对照情况 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 第二节 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第69-77页 |
| 1 材料与方法 | 第69-70页 |
| ·阳性克隆的表型确认 | 第69页 |
| ·cDNA插入片段的菌落PCR鉴定 | 第69-70页 |
| ·cDNA插入片段的测序 | 第70页 |
| ·cDNA插入片段的生物信息学分析 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-75页 |
| ·阳性克隆的表型确认 | 第70-71页 |
| ·cDNA插入片段的菌落PCR鉴定 | 第71页 |
| ·cDNA插入片段测序结果 | 第71-72页 |
| ·DNA序列分析 | 第72-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 总结与展望 | 第77-78页 |
| 附录: 主要培养基及试剂配方 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
