| 中文摘要 | 第1-17页 |
| 英文摘要 | 第17-19页 |
| 英文缩写词表 | 第19-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-50页 |
| ·重组抗体的种类 | 第23-24页 |
| ·双功能抗体的类型 | 第24-27页 |
| ·双功能抗体 | 第24-26页 |
| ·酶标抗体 | 第26-27页 |
| ·干扰素γ的生物活性及其与肝炎的临床治疗 | 第27-28页 |
| ·E.coli表达系统 | 第28-30页 |
| ·昆虫表达系统 | 第30-32页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第30-31页 |
| ·稳定表达系统 | 第31-32页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第32-34页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第34-44页 |
| ·甲醇代谢途径和甲醇代谢表型 | 第34-36页 |
| ·表达载体构成元件 | 第36-39页 |
| ·宿主菌 | 第39-40页 |
| ·遗传操作特性 | 第40-41页 |
| ·表达质粒与酵母基因组整合 | 第41页 |
| ·构建多拷贝整合菌株 | 第41-42页 |
| ·高密度发酵 | 第42-43页 |
| ·分泌蛋白的糖基化 | 第43-44页 |
| ·蛋白表达量 | 第44页 |
| ·抗体表达系统的选择 | 第44-45页 |
| ·抗HBsAg基因工程抗体及双功能抗体的研究现状 | 第45-47页 |
| ·本课题的研究背景、意义和主要内容 | 第47-50页 |
| ·研究背景和意义 | 第47-48页 |
| ·主要内容 | 第48-50页 |
| 第二章 体外人源抗HBsAg单链抗体-干扰素γ基因及其多拷贝载体的构建 | 第50-70页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·实验材料 | 第51-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器和设备 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·质粒的小量提取 | 第53页 |
| ·PCR反应 | 第53-54页 |
| ·DNA片段胶回收 | 第54页 |
| ·ScFv-INFγ片段克隆至pPICZaA | 第54-55页 |
| ·DNA序列测定 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-63页 |
| ·体外构建单链抗体-干扰素γ基因 | 第55-57页 |
| ·构建重组质粒pPICZaA／HBscFv-INFγ | 第57-59页 |
| ·HBscFv-INFγ.序列测定结果 | 第59-63页 |
| ·pPICZaA／HBScFv-INFγ体外多拷贝的构建 | 第63-68页 |
| ·体外构建pPICZaA／HBScFv-INFγ多拷贝的设计方案 | 第63-64页 |
| ·pPICZaA／(HBScFv-INFγ)2的构建 | 第64-66页 |
| ·pPICZaA／(HBscFv-INFγ)n=4，6拷贝载体的构建 | 第66-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第三章 抗HBsAg单链抗体-干扰素γ融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第70-90页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70-74页 |
| ·菌株和质粒 | 第70-71页 |
| ·主要试剂 | 第71-73页 |
| ·主要仪器和设备 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第74页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第74页 |
| ·制备酵母感受态细胞 | 第74-75页 |
| ·重组质粒转化酵母细胞 | 第75页 |
| ·菌落PCR检测目的基因整合 | 第75页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第75-76页 |
| ·转化菌株Mut类型的确定 | 第76页 |
| ·转化菌株的诱导表达 | 第76页 |
| ·蛋白质的浓缩 | 第76页 |
| ·制备鼠抗HBscFv单克隆抗体 | 第76-77页 |
| ·Western-blotting分析 | 第77页 |
| ·间接ELISA | 第77-78页 |
| ·竞争ELISA | 第78页 |
| ·酵母表达HBscFv-INFγ的初步提取纯化 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-87页 |
| ·LiCl法转化酵母GS115 | 第78-79页 |
| ·电转化法转化酵母X33 | 第79页 |
| ·酵母基因组DNA的提取与PCR检测 | 第79-80页 |
| ·HBscFv-INFγ.基因在工程菌中的诱导表达 | 第80-82页 |
| ·Western-blotting分析酵母表达上清中的HBscFv-INFγ | 第82-83页 |
| ·酵母菌体蛋白SDS-PAGE分析结果 | 第83-84页 |
| ·多拷贝转化子筛选结果 | 第84-87页 |
| ·讨论 | 第87-88页 |
| ·本章小结 | 第88-90页 |
| 第四章：重组人源HBScFv-INFγ融合蛋白的纯化和理化性质的研究 | 第90-110页 |
| ·引言 | 第90-91页 |
| ·实验材料 | 第91-93页 |
| ·菌株 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91-93页 |
| ·主要仪器设备 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93-97页 |
| ·Con-Sepharose 4B亲和层析纯化重组HBScFv-INFγ | 第93-95页 |
| ·14F7亲和层析纯化重组HBScFv-INFγ融合蛋白 | 第95-96页 |
| ·糖蛋白分析 | 第96页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第96页 |
| ·ELISA测定重组HBScFv-INFγ抗体抗原结合活性 | 第96-97页 |
| ·结果与分析 | 第97-106页 |
| ·HBScFv-INFγ融合蛋白理化性质的预测结果 | 第97-99页 |
| ·转化菌株表达上清的浓缩 | 第99-100页 |
| ·凝胶过滤脱盐 | 第100-101页 |
| ·Con-Sepharose 4B亲和层析纯化HBScFv-INFγ | 第101-102页 |
| ·14F7亲和层析纯化HBScFv-INFγ | 第102-104页 |
| ·糖蛋白分析 | 第104-106页 |
| ·ELISA结果 | 第106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| ·本章小节 | 第109-110页 |
| 第五章 工程酵母表达HBscFv-INFγ的发酵工艺优化 | 第110-126页 |
| ·引言 | 第110页 |
| ·实验材料 | 第110-112页 |
| ·菌株 | 第110页 |
| ·主要试剂 | 第110-111页 |
| ·培养基和溶液 | 第111页 |
| ·主要仪器设备 | 第111-112页 |
| ·实验方法 | 第112-113页 |
| ·培养时间对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第112页 |
| ·摇瓶装液量对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第112页 |
| ·不同接种量对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第112页 |
| ·添加不同甲醇浓度对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第112-113页 |
| ·发酵液甲醇浓度测定 | 第113页 |
| ·结果与分析 | 第113-125页 |
| ·重组HBScFv-INFγ工程菌的生长曲线和产物累积曲线 | 第113-115页 |
| ·摇瓶装液量对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第115-116页 |
| ·不同接种量对HBScFv-INFγ表达的影响 | 第116-117页 |
| ·甲醇浓度对重组HBScFv-INFγ工程菌表达的影响 | 第117-118页 |
| ·培养工艺参数的优化 | 第118-125页 |
| ·本章小结 | 第125-126页 |
| 结论与展望 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-138页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
