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过氧化氢酶去折叠及其与超氧化物歧化酶相互作用的研究

中文摘要第1-4页
英文摘要第4-10页
一、 前言第10-35页
 1 过氧化氢酶研究概况第10-11页
 2 过氧化氢酶的分类第11-16页
   ·单功能含血红素过氧化氢酶类(典型过氧化氢酶类)第12-13页
   ·过氧化氢酶一过氧化物酶类第13-15页
   ·含锰过氧化氢酶第15-16页
 3 过氧化氢酶在自然界的分布和对生物机体的生理作用第16-17页
 4 过氧化氢酶的晶体结构第17-19页
   ·过氧化氢酶单体结构第17页
   ·过氧化氢酶四聚体的四级结构第17-18页
   ·血红素辅基及其周围基团第18-19页
 5 过氧化氢酶的催化机制第19-20页
 6 过氧化氢酶催化过程中的电子转移以及NADPH的作用第20-23页
   ·NADPH与典型过氧化氢酶结合的方式第20-23页
   ·NADPH在过氧化氢酶催化机制中的作用第23页
 7 过氧化氢酶和超氧化物歧化酶第23-26页
   ·超氧阴离子自由基的毒性作用第23-25页
   ·超氧化物歧化酶对体内超氧阴离子自由基的清除第25-26页
   ·过氧化氢酶和超氧化物歧化酶相互作用的研究第26页
 8 荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用第26-27页
 9 微量热法在蛋白质研究中的应用第27-31页
   ·微量热法在蛋白质去折叠/折叠研究中的应用第28-30页
   ·微量热法在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的应用第30-31页
 10 生物传感器在研究蛋白质与蛋白质相互作用中的应用第31-33页
 11 本课题的研究内容及其意义第33-35页
二、 材料与方法第35-45页
 1 试剂与材料第35页
 2 实验仪器第35页
 3 实验方法第35-45页
   ·不同浓度变性剂对过氧化氢酶的变性第35-36页
   ·盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的紫外光谱研究第36页
   ·不同浓度变性剂对过氧化氢酶活力的影响第36页
   ·不同浓度脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的荧光光谱研究第36-40页
     ·内源荧光发射光谱研究第36-37页
     ·同步荧光光谱研究盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠第37-38页
     ·荧光偏振法研究脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠第38-39页
     ·荧光相图法研究有还原剂存在时脲诱导溶菌酶去折叠第39-40页
     ·荧光相图法研究脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠第40页
   ·等温滴定量热法研究低浓度盐酸胍对过氧化氢酶的变性作用第40-42页
     ·低浓度盐酸胍诱导蛋白质形成中间态的热力学模型第40-41页
     ·低浓度盐酸胍诱导过氧化氢酶形成中间态的等温滴定量热实验第41-42页
   ·过氧化氢酶与超氧化物歧化酶作用的等温滴定量热实验第42页
   ·过氧化氢酶与超氧化物歧化酶作用的荧光滴定实验第42-43页
   ·过氧化氢酶与超氧化物歧化酶作用的共振镜生物传感器实验第43-45页
     ·缓冲溶液的配制第43页
     ·超氧化物歧化酶的固定第43-44页
     ·过氧化氢酶与固定在芯片上的超氧化物歧化酶的结合反应第44-45页
三、 结果第45-59页
 1 盐酸胍变性的过氧化氢酶的紫外光谱第45页
 2 不同浓度盐酸胍和脲中过氧化氢酶的残余活力研究第45-46页
 3 有还原剂存在时脲诱导溶菌酶去折叠的研究第46页
 4 同步荧光光谱研究盐酸胍对过氧化氢酶的变性作用第46-48页
 5 盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的内源荧光研究第48-50页
 6 脲诱导过氧化氢酶去折叠的内源荧光研究第50-53页
 7 低浓度盐酸胍诱导过氧化氢酶形成中间态的热力学研究第53-55页
 8 荧光滴定法研究过氧化氢酶和超氧化物歧化酶相互作用的热力学第55页
 9 等温滴定量热法研究过氧化氢酶与超氧化物歧化酶相互作用的热力学第55-57页
 10 共振镜生物传感器法研究过氧化氢酶与超氧化物歧化酶相互作用的热力学和动力学第57-59页
四、 讨论第59-66页
 1 乙醇对过氧化氢酶活性与构象的影响第59-60页
 2 温度诱导过氧化氢酶去折叠第60页
 3 过氧化氢酶Ⅰ从低催化活性形式向高催化活性形式的热转变第60-61页
 4 过氧化氢酶活性部位的柔性第61页
 5 脲和盐酸胍对过氧化氢酶的变性作用第61页
 6 蛋白质的内源荧光变化第61-62页
 7 过氧化氢酶的复性第62页
 8 脲和盐酸胍诱导蛋白质去折叠及其稳定和激活蛋白质机制的比较第62-63页
 9 盐酸胍的稀释热第63页
 10 低浓度盐酸胍诱导过氧化氢酶形成中间态的热力学第63-64页
 11 超氧化物歧化酶结合了过氧化氢酶以后性质的变化第64页
 12 三种方法研究过氧化氢酶与超氧化物歧化酶相互作用的比较第64-66页
参考文献第66-80页
在读期间发表和待发表的论文目录第80-81页
致谢第81页

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