| 中文摘要 | 第1-3页 |
| 英文摘要 | 第3-4页 |
| 缩略词 | 第4-10页 |
| 引言 | 第10-24页 |
| 1 β-甘露聚糖酶文献综述 | 第10-21页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源、性质与诱导表达 | 第12-17页 |
| ·动物中分离到的β-甘露聚糖酶 | 第12页 |
| ·植物中β-甘露聚糖酶 | 第12页 |
| ·微生物产生的β-甘露聚糖酶 | 第12-17页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分类、鉴定与酶活力测定 | 第17页 |
| ·β-甘露聚糖酶的纯化方法 | 第17页 |
| ·β-甘露聚糖酶产生菌的筛选方法 | 第17页 |
| ·β-甘露聚糖酶的作用方式及其水解产物 | 第17-19页 |
| ·β-甘露聚糖酶的应用与开发 | 第19-21页 |
| ·甘露聚糖酶在饲料工业中的作用 | 第19页 |
| ·β-甘露聚糖酶在造纸工业中的应用 | 第19-20页 |
| ·β-甘露聚糖酶水解产物--甘露低聚糖的生理功能 | 第20-21页 |
| 2 里氏木霉(T.reesei)RUT-C30文献综述 | 第21-23页 |
| ·里氏木霉的培养性状 | 第21页 |
| ·里氏木霉产纤维素酶的研究 | 第21-22页 |
| ·里氏木霉产木聚糖酶的研究 | 第22页 |
| ·里氏木霉产其他糖类水解酶的研究 | 第22-23页 |
| 3 结束语 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-41页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·里氏木霉RUT-C30 | 第24页 |
| ·大肠杆菌JM109 | 第24页 |
| ·质粒载体 | 第24页 |
| ·酶 | 第24页 |
| ·化学试剂 | 第24-25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-41页 |
| ·培养基的配制 | 第25-26页 |
| ·里氏木霉RUT-C30产孢子培养基 | 第25页 |
| ·里氏木霉RUT-C30保存培养基 | 第25页 |
| ·里氏木霉RUT-C30产酶培养基母液 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌LB培养基 | 第26页 |
| ·缓冲液及主要试剂配置 | 第26-28页 |
| ·TE缓冲液 | 第26页 |
| ·10％十二烷基肌氨酸二钠原液 | 第26页 |
| ·0.75mol／L柠檬酸钠原液 | 第26页 |
| ·2mol／L NaAc-Hac缓冲液 | 第26页 |
| ·3mol／L NaAc-HAc缓冲液 | 第26页 |
| ·异硫氰酸胍液 | 第26页 |
| ·10×TAE | 第26-27页 |
| ·PBS缓冲液 | 第27页 |
| ·IPTG贮液 | 第27页 |
| ·BCIP贮液 | 第27页 |
| ·X-gal贮液 | 第27页 |
| ·溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ | 第27页 |
| ·Dnase终止反应液 | 第27页 |
| ·中性洗涤剂 | 第27页 |
| ·EB储备液 | 第27页 |
| ·RNaseA | 第27页 |
| ·氨苄青霉素(Amp)贮液 | 第27页 |
| ·6×DNA Loading Buffer | 第27页 |
| ·3，5二硝基水杨酸 | 第27-28页 |
| ·双缩脲试剂 | 第28页 |
| ·3，5二硝基水杨酸法测定β-甘露聚糖酶的活力 | 第28-29页 |
| ·双缩脲法测定培养液中总蛋白含量 | 第29-30页 |
| ·小室培养法观测菌体生长形态 | 第30页 |
| ·里氏木霉RUT-C30产β-甘露聚糖酶的诱导培养基碳源配比选择 | 第30页 |
| ·离心 | 第30页 |
| ·异硫氰酸胍法提取菌丝体总RNA | 第30-31页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第31页 |
| ·比色法确定DNA与RNA的浓度与纯度 | 第31-32页 |
| ·用无RNA酶的DNA酶处理总RNA | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-34页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增β-甘露聚糖酶开放阅读框全长 | 第33-34页 |
| ·PCR产物回收 | 第34页 |
| ·质粒载体与PCR产物的限制酶消化 | 第34-35页 |
| ·载体和目的片段的连接反应 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·氯化钙法 | 第35页 |
| ·PEG法 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第36页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第36页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第37页 |
| ·阳性克隆子的快速鉴定法 | 第37页 |
| ·阳性克隆子的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆子的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·阳性克隆子所插入的目的基因的序列分析 | 第38-41页 |
| ·测序原理和特点 | 第38-39页 |
| ·常见问题解析 | 第39-41页 |
| 结果与讨论 | 第41-56页 |
| 1 里氏木霉RUT-C30产β-甘露聚糖酶的诱导培养基碳源配比选择结果 | 第41-47页 |
| ·单因子正交实验结果 | 第41-42页 |
| ·双因子正交实验结果 | 第42-43页 |
| ·三因子正交实验结果 | 第43-44页 |
| ·四因子正交实验结果 | 第44-45页 |
| ·五因子正交实验结果 | 第45页 |
| ·从上面的结果中选取酶活力与菌体生长情况较好的可变碳源组成配方 | 第45-47页 |
| 2 里氏木霉小室培养法观测菌体生长形态结果 | 第47-48页 |
| 3 总RNA提取结果 | 第48-49页 |
| 4 无RNA酶的DNA酶处理总RNA的结果 | 第49页 |
| 5 RT-PCR结果 | 第49-50页 |
| 6 阳性克隆子的筛选与鉴定结果 | 第50页 |
| ·阳性克隆子的PCR鉴定结果 | 第50页 |
| ·阳性克隆子的酶切鉴定结果 | 第50页 |
| 7 阳性克隆子所插入的目的基因的序列分析 | 第50-55页 |
| ·测序结果 | 第50-52页 |
| ·序列同源性比较 | 第52-55页 |
| 8 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-72页 |
