| l 引言 | 第1-28页 |
| 1．1 马铃薯Y病毒 | 第11-14页 |
| 1．1．1 马铃薯Y病毒属病毒基因组复制及表达 | 第11-12页 |
| 1．1．2 病毒的系统侵染、传播，植物症状表现及抗性 | 第12-14页 |
| 1．2 马铃薯抗病毒基因工程 | 第14-16页 |
| 1．2．1 病毒来源的马铃薯转基因研究情况 | 第14页 |
| 1．2．2 非病毒来源的马铃薯抗病毒基因工程研究进展 | 第14-16页 |
| 1．3 转录后基因沉默与转基因植物病毒抗性 | 第16-20页 |
| 1．3．1 RNA沉默的特点及转基因植物中病毒诱导的RNA沉默 | 第17-18页 |
| 1．3．2 非转基因植物中病毒诱导的RNA沉默 | 第18页 |
| 1．3．3 病毒诱导转基因植物RNA沉默的机制 | 第18-19页 |
| 1．3．4 病毒对RNA沉默的抑制 | 第19-20页 |
| 1．3．5 RNA沉默是植物自然的抗病毒机制 | 第20页 |
| 1．4 农杆菌介导的基因转化 | 第20-25页 |
| 1．4．1 农杆菌介导的基因转化机理 | 第21-22页 |
| 1．4．2 植物对农杆菌侵染的反应 | 第22-23页 |
| 1．4．3 转基因的遗传表达 | 第23-25页 |
| 1．5 转基因马铃薯安全性评价 | 第25-26页 |
| 1．5．1 转基因马铃薯中抗生素抗性基因的安全性 | 第25-26页 |
| 1．5．2 转基因马铃薯中目的基因的安全性 | 第26页 |
| 1．6 本研究立论依据和主要研究内容 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-40页 |
| 2．1 材料 | 第28-29页 |
| 2．1．1 供试植物及转化受体 | 第28页 |
| 2．1．2 实验菌株及表达载体质粒及植物病毒 | 第28页 |
| 2．1．3 培养基 | 第28-29页 |
| 2．1．4 酶，试剂盒及仪器 | 第29页 |
| 2．1．5 PCR引物 | 第29页 |
| 2．2 方法 | 第29-31页 |
| 2．2．1 农杆菌介导基因转化马铃薯基本方法 | 第29-30页 |
| 2．2．2 马铃薯转化受体体系的建立 | 第30-31页 |
| 2．2．2．1 外植体的选择 | 第30页 |
| 2．2．2．2 愈伤组织的诱导与分化 | 第30页 |
| 2．2．2．3 愈伤组织诱导过程中的选择 | 第30页 |
| 2．2．2．4 生根过程中的选择 | 第30-31页 |
| 2．2．3 农杆菌转化条件的优化 | 第31页 |
| 2．2．3．1 外植体细胞对农杆菌感受态的选择 | 第31页 |
| 2．2．3．2 农杆菌的浓度对转化率的影响 | 第31页 |
| 2．2．3．3 农杆菌侵染时间对转化率的影响 | 第31页 |
| 2．2．3．4 共培养对转化的影响 | 第31页 |
| 2．3 转基因马铃薯植株的PCR检测 | 第31-34页 |
| 2．3．1 质粒DNA的大量提取 | 第31-32页 |
| 2．3．2 植物总DNA的提取（CTAB法) | 第32-33页 |
| 2．3．3 PCR反应 | 第33-34页 |
| 2．3．4 邑泳检测扩增结果 | 第34页 |
| 2．4 转基因马铃薯植株的Southern blot分析 | 第34-36页 |
| 2．4．1 质粒提取 | 第34页 |
| 2．4．2 马铃薯总DNA提取 | 第34页 |
| 2．4．3 植物总DNA酶切、电泳和转膜杂交 | 第34-36页 |
| 2．4．3．1 马铃薯总DNA的酶切 | 第34页 |
| 2．4．3．2 酶切DNA凝胶电泳 | 第34页 |
| 2．4．3．3 转膜 | 第34-35页 |
| 2．4．3．4 探针的制备 | 第35-36页 |
| 2．4．3．5 杂交 | 第36页 |
| 2．5 转基因马铃薯植株的Northern blot分析 | 第36-38页 |
| 2．5．1 马铃薯总RNA的提取（异硫氢酸胍法) | 第36-37页 |
| 2．5．2 总RNA变性凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2．5．3 探针的制备 | 第38页 |
| 2．5．4 杂交 | 第38页 |
| 2．6 PVY病毒抗性检测 | 第38-39页 |
| 2．6．1 接种 | 第38页 |
| 2．6．2 检测方法 | 第38-39页 |
| 2．7 转基因马铃薯植株体内转基因的表达 | 第39-40页 |
| 2．7．1 材料准备 | 第39页 |
| 2．7．2 方法 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-54页 |
| 3．1 马铃薯试管苗处理： | 第40-41页 |
| 3．1．1 试管苗扩繁 | 第40页 |
| 3．1．2 多效唑（MET）对试管苗生长的影响 | 第40-41页 |
| 3．2 马铃薯基因转化受体系统的建立 | 第41-43页 |
| 3．2．1 外植体的选择 | 第41页 |
| 3．2．2 愈伤组织的诱导与分化 | 第41-42页 |
| 3．2．3 愈伤组织诱导过程中选择压力的确定 | 第42-43页 |
| 3．2．4 生根过程中选择压力的确定 | 第43页 |
| 3．3 农杆菌介导外源基因转化马铃薯 | 第43-48页 |
| 3．3．1 外植体预培养对转化率的影响 | 第44页 |
| 3．3．2 农杆菌的浓度对转化率的影响 | 第44-45页 |
| 3．3．3 农杆菌侵染时间对转化率的影响 | 第45-46页 |
| 3．3．4 共培养对转化率的影响 | 第46-47页 |
| 3．3．5 Kan抗性苗的获得 | 第47页 |
| 3．3．6 Karl抗性苗的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3．4 转基因马铃薯抗性遗传及抗性机制研究 | 第48-54页 |
| 3．4．1 RNA介导抗性在马铃薯无性繁殖过程中遗传稳定性 | 第48-49页 |
| 3．4．2 转基因马铃薯田间抗性试验 | 第49-50页 |
| 3．4．3 外源基因整合拷贝数与抗病性关系 | 第50-52页 |
| 3．4．4 RNA积累量与抗病性关系 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 附录 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 发表论文 | 第80页 |
