| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-9页 |
| 第二章 材料与方法 | 第9-20页 |
| 2．1 材料 | 第9-11页 |
| 2．1．1 材料及菌株 | 第9页 |
| 2．1．2 工具酶及试剂 | 第9-11页 |
| 2．1．3 引物设计及合成 | 第11页 |
| 2．1．4 主要仪器 | 第11页 |
| 2．2 方法 | 第11-20页 |
| 2．2．1 扩增Pre-hIL-18 | 第11-12页 |
| 2．2．2 hIL-18的克隆与表达 | 第12-16页 |
| 2．2．2．1 目的DNAhIL-18的制备 | 第12-13页 |
| 2．2．2．2 质粒pKKH的制备 | 第13-14页 |
| 2．2．2．3 目的基因hIL-18及载体pKKH的酶切 | 第14页 |
| 2．2．2．4 目的基因hIL-18和载体pKKH酶切片段的连接 | 第14页 |
| 2．2．2．5 感受态细胞DH5（的制备 | 第14-15页 |
| 2．2．2．6 感受态细胞DH5（的转化 | 第15页 |
| 2．2．2．7 大肠杆菌克隆的酶切鉴定 | 第15页 |
| 2．2．2．8 hIL-18的表达 | 第15-16页 |
| 2．2．3 hIL-18-Ile48Met的克隆与表达 | 第16-20页 |
| 2．3．3．1 用重叠延伸（overlap）PCR法制备hIL-18-Ile48Met | 第16-18页 |
| 2．3．3．2 质粒pBV220的制备 | 第18页 |
| 2．3．3．3 hIL-18-Ile48Met和载体pBV220的酶切 | 第18页 |
| 2．3．3．4 hIl-18-Ile48Met和载体pBV220酶切片段的连接 | 第18页 |
| 2．3．3．5 感受态细胞的制备和转化 | 第18页 |
| 2．3．3．6 大肠杆菌克隆的酶切鉴定 | 第18页 |
| 2．3．3．7 突变体hIL-18-Ile48Met的表达 | 第18-20页 |
| 第三章 结果 | 第20-30页 |
| 3．1 hIL-18的克隆与表达 | 第20-23页 |
| 3．1．1 RT-PCR法获取pre-hIL-18 | 第20页 |
| 3．1．2 PCR法获得hIL-18 | 第20-21页 |
| 3．1．3 pKKH-hIL-18重组载体的构建 | 第21页 |
| 3．1．4 pKKH-hIL-18酶切鉴定 | 第21-22页 |
| 3．1．5 hIL-18的表达 | 第22-23页 |
| 3．2 hIL-18-L48Met的克隆与表达 | 第23-30页 |
| 3．2．1 重叠延伸（OverlapPCR）法获得突变基因 | 第23-25页 |
| 3．2．2 pBV220-hIL-18-Ile48Met重组体的构建 | 第25-26页 |
| 3．2．3 pBV220-hIL-18-Ile48Met重组体的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 3．2．4 测序 | 第27页 |
| 3．2．5 hIL-18-Ile48Met突变株的表达 | 第27-30页 |
| 第四章 讨论 | 第30-31页 |
| 4．1 表达载体的比较 | 第30页 |
| 4．2 OverLapPCR法定点突变hIL-18基因 | 第30页 |
| 4．3 hIL-18及其突变体的表达 | 第30-31页 |
| 结论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-33页 |
| 综述 | 第33-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
