| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一部分 前言 | 第7-14页 |
| ·bFGF 与血管再生 | 第7-8页 |
| ·bFGF 与肺癌 | 第8-9页 |
| ·小分子抗体及其在肿瘤诊治方面的应用 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统及其在基因工程抗体中的应用 | 第10-11页 |
| ·研究目的及意义 | 第11-13页 |
| ·实验技术路线 | 第13-14页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第14-34页 |
| ·实验材料 | 第14-18页 |
| ·载体和菌株 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第14-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-34页 |
| ·抗 bFGF ScFv 基因的扩增及克隆载体的构建 | 第18-21页 |
| ·抗 bFGF Diabody 基因的构建及克隆载体的构建 | 第21-24页 |
| ·ScFv、Diabody 酵母表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·pPICZαA–ScFv/Diabody 转化毕赤酵母 GS115 及酵母工程菌的筛选 | 第25-27页 |
| ·ScFv、Diabody 酵母工程菌的诱导表达及鉴定 | 第27-29页 |
| ·ScFv、Diabody 酵母工程菌的摇瓶发酵及纯化 | 第29-32页 |
| ·CCK-8 法检测人肺腺癌细胞株 A549 细胞增殖抑制作用 | 第32页 |
| ·Hoechst 33258 染色观察人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡 | 第32-33页 |
| ·Annexin V-FITC/PI 检测 Diabody 诱导人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡 | 第33-34页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第34-46页 |
| ·抗 bFGF ScFv 基因的克隆及表达载体构建 | 第34-36页 |
| ·抗 bFGF Diabody 基因的克隆及表达载体构建 | 第36-37页 |
| ·pPICZαA–ScFv 转化毕赤酵母 GS115 及酵母工程菌的筛选 | 第37-38页 |
| ·pPICZαA–ScFv、pPICZαA-Diabody 线性化质粒的制备 | 第37页 |
| ·高拷贝转化子筛选 | 第37-38页 |
| ·重组酵母的表达及鉴定 | 第38-39页 |
| ·最佳诱导表达时间的确定 | 第39-40页 |
| ·表达产物的纯化 | 第40-43页 |
| ·表达产物的纯化及 SDS-PAGE 鉴定 | 第40-42页 |
| ·目的蛋白浓度测定 | 第42页 |
| ·间接 ELISA 检测 | 第42-43页 |
| ·肿瘤细胞增殖抑制试验 | 第43-44页 |
| ·Hoechst 33258 染色观察人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡 | 第44-45页 |
| ·Annexin V-FITC/PI 检测 Diabody 诱导人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡 | 第45-46页 |
| 第四部分 讨论 | 第46-48页 |
| 总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 中英文略语表 | 第55-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 1 在校期间发表论文及申请专利情况 | 第57页 |
| 2 在校期间参加的学术活动 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
