| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·艰难梭菌感染概况 | 第15-19页 |
| ·流行状况 | 第15-16页 |
| ·艰难梭菌感染诊断方法 | 第16-17页 |
| ·艰难梭菌感染治疗方法 | 第17-19页 |
| ·艰难梭菌毒素TcdA 和TcdB | 第19-23页 |
| ·毒素的结构 | 第19-21页 |
| ·毒素的分子作用机理 | 第21-22页 |
| ·毒素在疾病中的作用 | 第22-23页 |
| ·艰难梭菌疾病疫苗研究 | 第23-24页 |
| ·类毒素疫苗 | 第23-24页 |
| ·重组毒素片段疫苗 | 第24页 |
| ·本课题的目的意义和研究内容 | 第24-27页 |
| ·目的意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 突变的艰难梭菌毒素及其生物学活性研究 | 第27-51页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-35页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·细胞培养方法 | 第29页 |
| ·重组突变毒素质粒构建 | 第29-30页 |
| ·全毒素和突变毒素质粒转化 | 第30-31页 |
| ·重组全毒素和突变毒素的表达和纯化 | 第31页 |
| ·葡萄糖基转移酶活性检测 | 第31-32页 |
| ·全毒素和突变毒素免疫荧光标记 | 第32页 |
| ·毒素与细胞结合以及发生内吞作用检测 | 第32页 |
| ·InsP6-介导的毒素自切割作用 | 第32页 |
| ·细胞致变圆活性及细胞毒性 | 第32-33页 |
| ·回肠结扎实验 | 第33页 |
| ·组织病例切片实验 | 第33页 |
| ·MPO 测定 | 第33页 |
| ·RT-PCR 检测回肠组织中细胞因子的表达 | 第33-34页 |
| ·ELISA | 第34-35页 |
| ·体内毒性实验 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-49页 |
| ·突变毒素的构建及纯化鉴定 | 第35-37页 |
| ·突变毒素的葡萄糖基转移酶活性 | 第37-39页 |
| ·突变毒素与细胞结合以及发生内吞作用的能力 | 第39-40页 |
| ·突变毒素的半胱氨酸蛋白酶活性 | 第40-41页 |
| ·突变毒素的致细胞变圆活性及细胞毒性 | 第41-43页 |
| ·突变毒素aTcdA 的肠毒性 | 第43-46页 |
| ·突变毒素的促炎症反应活性 | 第46-47页 |
| ·突变毒素的体内毒性 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 小鼠艰难梭菌感染和复发模型的建立 | 第51-67页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-57页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·艰难梭菌孢子制备及VPI10463 菌株的培养 | 第52-53页 |
| ·小鼠艰难梭菌感染模型的构建 | 第53页 |
| ·小鼠艰难梭菌复发感染模型的构建 | 第53-54页 |
| ·艰难梭菌复发感染后的治疗 | 第54页 |
| ·小鼠粪便和血清样品收集 | 第54-55页 |
| ·粪便细胞毒性测定 | 第55页 |
| ·粪便细菌培养 | 第55-56页 |
| ·抗体检测和血清中和抗体实验 | 第56页 |
| ·组织病理学切片 | 第56-57页 |
| ·结果和讨论 | 第57-66页 |
| ·感染模型中艰难梭菌孢子感染剂量的确定 | 第57-58页 |
| ·小鼠艰难梭菌复发模型 | 第58-59页 |
| ·小鼠首次和复发感染艰难梭菌后的肠道疾病症状 | 第59-60页 |
| ·感染艰难梭菌的小鼠粪便中艰难梭菌分离及毒素检测 | 第60-61页 |
| ·艰难梭菌感染后小鼠产生的免疫反应 | 第61-64页 |
| ·小鼠复发艰难梭菌感染后的治疗 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 艰难梭菌突变毒素的免疫原性及交叉免疫反应研究 | 第67-76页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·类毒素TcdB（toxoid B）与aTcdB 的制备 | 第68页 |
| ·小鼠免疫方案 | 第68页 |
| ·艰难梭菌UK1 孢子制备及VPI10463 菌株培养 | 第68页 |
| ·小鼠艰难梭菌感染 | 第68-69页 |
| ·血清ELISA 检测 | 第69页 |
| ·血清中和抗体实验 | 第69页 |
| ·注射重组全毒素 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-75页 |
| ·aTcdB 能诱导产生比类毒素TcdB 更强的IgG 免疫反应 | 第69-71页 |
| ·aTcdB 免疫能产生比类毒素TcdB 更强的中和抗体 | 第71-72页 |
| ·aTcdB 免疫能够保护小鼠在致死剂量的毒素注射中存活 | 第72页 |
| ·治疗CDI 同时需要抗毒素TcdA 和TcdB 的抗体 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 第五章 突变的嵌合体毒素构建及其免疫原性研究 | 第76-83页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·嵌合体毒素的构建 | 第77页 |
| ·葡萄糖基转移酶活性测定 | 第77-78页 |
| ·细胞毒性测定 | 第78页 |
| ·小鼠免疫方案 | 第78页 |
| ·血清ELISA 检测 | 第78页 |
| ·血清中和抗体检测 | 第78页 |
| ·注射重组全毒素 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-82页 |
| ·嵌合体毒素的构建 | 第78-80页 |
| ·嵌合体毒素产生的IgG 免疫反应 | 第80页 |
| ·嵌合体能诱导产生同时抗TcdA 和TcdB 的中和抗体 | 第80-81页 |
| ·cTxAB 免疫后体内保护效果 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 第六章 嵌合体毒素在疫苗应用中的研究 | 第83-92页 |
| ·引言 | 第83-84页 |
| ·材料与方法 | 第84页 |
| ·实验材料 | 第84页 |
| ·艰难梭菌孢子的制备 | 第84页 |
| ·小鼠艰难梭菌感染 | 第84页 |
| ·结果与讨论 | 第84-91页 |
| ·cTxAB 免疫小鼠在艰难梭菌VPI10463 感染中存活 | 第84-85页 |
| ·cTxAB 免疫能够提供长期保护 | 第85-86页 |
| ·cTxAB 免疫小鼠感染超毒菌株 | 第86-88页 |
| ·cTxAB 免疫一次能够减弱艰难梭菌感染症状 | 第88页 |
| ·cTxAB 免疫预防艰难梭菌复发 | 第88-90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 结论与展望 | 第92-96页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 1、突变毒素的生物学活性性质 | 第92页 |
| 2、小鼠艰难梭菌感染模型和复发模型 | 第92-93页 |
| 3、突变毒素的交叉免疫原性 | 第93页 |
| 4、嵌合体毒素疫苗 | 第93页 |
| 创新性成果 | 第93-94页 |
| 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-112页 |
| 附录1 | 第112-115页 |
| 附录2 | 第115-116页 |
| 附录3 | 第116-118页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 附件 | 第122页 |
