| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 研究背景 | 第10-30页 |
| ·炎症研究进展 | 第11-14页 |
| ·概述 | 第11页 |
| ·炎症的分类 | 第11页 |
| ·炎症的原因及其影响因素 | 第11-14页 |
| ·奶牛乳房炎研究概况 | 第14-21页 |
| ·奶牛乳房炎的分类 | 第14-15页 |
| ·奶牛乳房炎的病因 | 第15-17页 |
| ·奶牛乳房炎的发病机理 | 第17-18页 |
| ·奶牛乳房炎的诊断 | 第18-19页 |
| ·体细胞评分(Somatic cell seore,SCS) | 第19-20页 |
| ·乳房炎抗性功能基因的筛选及研究 | 第20-21页 |
| ·TLRs(Toll-like Receptors)研究进展 | 第21-25页 |
| ·TLRs 的发现 | 第21页 |
| ·TLRs 结构及分布 | 第21-22页 |
| ·TLRs 成员及其配体 | 第22页 |
| ·TLRs 介导的信号传导通路 | 第22-24页 |
| ·TLR4 与疾病 | 第24-25页 |
| ·本试验中涉及的分子生物学方法 | 第25-28页 |
| ·限制性片断长度多态性 | 第25-26页 |
| ·实时定量PCR | 第26-28页 |
| ·本试验的试验思路与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 采用测序技术对TLR4 基因外显子3 多态位点进行检测 | 第30-36页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验样本的采集 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·主要分析工具软件 | 第30页 |
| ·试验试剂 | 第30页 |
| ·试剂配制 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-33页 |
| ·牛血液基因组DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第32页 |
| ·TLR4 基因外显子3 的 PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR 产物的检测 | 第33页 |
| ·PCR 产物胶回收(杭州博日试剂盒) | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·牛血液基因组DNA 提取结果 | 第33-34页 |
| ·TLR4 基因外显子3 PCR 扩增结果及测序结果 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·DNA 提取的优化 | 第35页 |
| ·对试验中所采用的PCR 产物直接测序方法的讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 TLR4 基因外显子3 多态性位点的 PCR-RFLP 检测 | 第36-45页 |
| ·试验材料 | 第36页 |
| ·试验样本的采集 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·主要分析工具软件 | 第36页 |
| ·试验试剂 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·牛血液基因组DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·TLR4 基因外显子3 多态性位点的 PCR-RFLP 检测 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·TLR4 基因外显子3 多态位点PCR-RFLP 结果 | 第39-40页 |
| ·TLR4基因外显子3 TLR4 E3+1656和E3+2021位点等位基因频率和基因型频率 | 第40-41页 |
| ·TLR4 基因外显子3 TLR4 E3+1656 和E3+2021 位点在奶牛群体中的遗传特性 | 第41页 |
| ·TLR4 基因外显子3 酶切多态性与奶牛乳房炎的关联分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| ·关于TLR4 基因多态性及群体遗传分析 | 第42-43页 |
| ·TLR4 基因多态性与奶牛乳房炎的关系 | 第43页 |
| ·TLR4 基因多态性与奶牛品种和年龄的关系 | 第43-45页 |
| 第四章 处于TLR 信号通路上相关基因的定量分析 | 第45-70页 |
| ·试验材料 | 第45-46页 |
| ·试验样本的选择 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·主要分析工具软件 | 第45页 |
| ·试验试剂 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45-46页 |
| ·试验方法 | 第46-50页 |
| ·总RNA 的提取及检测 | 第46页 |
| ·RT-PCR 制备cDNA 及其纯化 | 第46-47页 |
| ·TLR4 E3+2021 位点不同基因型个体的基因表达定量分析 | 第47-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-67页 |
| ·牛血液总RNA 提取结果 | 第50-51页 |
| ·目的基因cDNA 片段普通PCR 产物电泳 | 第51页 |
| ·目的基因质粒DNA 线性化 | 第51页 |
| ·基因测序结果 | 第51-55页 |
| ·基因标准曲线 | 第55-58页 |
| ·Quantitative Real-Time PCR 扩增曲线 | 第58-62页 |
| ·基因熔解曲线 | 第62-66页 |
| ·基因表达量与不同基因型个体的相关分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-70页 |
| ·关于RNA 操作的讨论 | 第67-69页 |
| ·关于Quantitative Real-Time PCR | 第69页 |
| ·TLR4 基因多态性与基因mRNA 表达量的关系 | 第69-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
