| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 葡萄与霜霉病介绍 | 第13页 |
| 1.2 葡萄霜霉病抗性机理的研究 | 第13-16页 |
| 1.2.1 葡萄霜霉菌及入侵致病过程 | 第13-15页 |
| 1.2.2 葡萄霜霉病抗性机理研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3 葡萄白藜芦醇及其衍生物的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 白藜芦醇的化学性质 | 第16-17页 |
| 1.3.2 白藜芦醇合成酶的研究 | 第17-18页 |
| 1.3.3 葡萄白藜芦醇衍生物的合成 | 第18页 |
| 1.3.4 葡萄白藜芦醇及其衍生物的生物活性 | 第18-19页 |
| 1.4 葡萄白藜芦醇及其衍生物对葡萄的抗病作用 | 第19-21页 |
| 1.5 葡萄白藜芦醇及其衍生物合成酶基因的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.5.1 植物中白藜芦醇合成酶(Stilbene synthase,STS) | 第21-22页 |
| 1.5.2 葡萄白藜芦醇合成酶基因的研究 | 第22-24页 |
| 1.5.3 葡萄白藜芦醇-O-甲基转移酶基因(ReveratrolO-methyltransferase,ROMT) | 第24-26页 |
| 1.6 葡萄白藜芦醇及其衍生物合成酶基因启动子结构与功能研究 | 第26-28页 |
| 1.6.1 葡萄白藜芦醇及其衍生物合成酶基因启动子的扩增 | 第26-27页 |
| 1.6.2 葡萄STS、ROMT和ROGT基因表达的影响因素 | 第27-28页 |
| 1.7 葡萄转基因研究进展 | 第28-29页 |
| 1.7.1 葡萄瞬时转化研究进展 | 第28-29页 |
| 1.7.2 葡萄白藜芦醇及其衍生物相关基因转化研究进展 | 第29页 |
| 1.8 本论文的目的意义和研究内容 | 第29-31页 |
| 1.8.1 目的意义 | 第29页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 不同抗性葡萄品种的白藜芦醇及其衍生物的积累模式 | 第31-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-36页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 | 第32页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 扫描电镜观察材料处理 | 第32-33页 |
| 2.1.5 CTAB法提取葡萄总RNA及消化DNA | 第33-34页 |
| 2.1.6 反转录合成cDNA | 第34页 |
| 2.1.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第34-35页 |
| 2.1.8 白藜芦醇及其衍生物的提取 | 第35页 |
| 2.1.9 白藜芦醇及其衍生物的UPLC-ESI-MS/MS检测 | 第35-36页 |
| 2.1.10 统计分析 | 第36页 |
| 2.2 结果 | 第36-40页 |
| 2.2.1 活体接种霜霉菌的叶片观察结果 | 第36-37页 |
| 2.2.2 UPLC-ESI-MS/MS检测白藜芦醇及其衍生物含量 | 第37-38页 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测白藜芦醇及其衍生物相关合成酶基因表达量 | 第38-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 不同抗性葡萄品种STS、ROMT和GT基因启动子克隆及表达活性分析 | 第43-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-53页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第43-44页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.4 葡萄叶片DNA提取与纯化 | 第45页 |
| 3.1.5 葡萄STS、ROMT和GT基因启动子序列的克隆 | 第45-47页 |
| 3.1.6 扩增产物的电泳检测、回收纯化 | 第47页 |
| 3.1.7 回收片段的连接克隆测序 | 第47-48页 |
| 3.1.8 瞬时表达载体构建 | 第48-50页 |
| 3.1.9 葡萄离体叶片瞬时转化 | 第50-51页 |
| 3.1.10 葡萄瞬时转化叶片GUS活性检测 | 第51-52页 |
| 3.1.11 葡萄瞬时转化叶片GFP蛋白相对荧光强度检测 | 第52页 |
| 3.1.12 统计分析 | 第52-53页 |
| 3.2 实验结果 | 第53-61页 |
| 3.2.1 葡萄STS、ROMT和GT基因启动子序列克隆与分析 | 第53页 |
| 3.2.2 葡萄STS、ROMT和GT基因启动子顺式作用元件分析 | 第53-55页 |
| 3.2.3 葡萄STS基因启动子分析 | 第55-57页 |
| 3.2.4 圆叶葡萄品种MrSTS基因启动子的功能分析 | 第57-59页 |
| 3.2.5 葡萄STS、ROMT和GT基因启动子启动GUS活性分析 | 第59-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 激素对白藜芦醇及其衍生物的积累和相关基因表达的影响 | 第63-75页 |
| 4.1 材料与方法 | 第64-65页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 | 第64页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第64页 |
| 4.1.4 激素喷施实验 | 第64页 |
| 4.1.5 激素喷施后接种霜霉实验 | 第64页 |
| 4.1.6 CTAB法提取葡萄叶片总RNA及纯化 | 第64-65页 |
| 4.1.7 反转录cDNA合成 | 第65页 |
| 4.1.8 荧光实时定量PCR | 第65页 |
| 4.1.9 白藜芦醇及其衍生物和植物激素提取和UPLC-ESI-MS/MS检测 | 第65页 |
| 4.1.10 统计分析 | 第65页 |
| 4.2 结果 | 第65-73页 |
| 4.2.1 活体接种霜霉菌对植物激素含量的影响 | 第65-66页 |
| 4.2.2 活体喷施ABA对白藜芦醇及其衍生物含量及相关基因表达的影响 | 第66-68页 |
| 4.2.3 活体喷施MeJA对白藜芦醇及其衍生物含量及相关基因表达的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.4 活体喷施SA对白藜芦醇及其衍生物含量及相关基因表达的影响 | 第69-70页 |
| 4.2.5 喷施不同浓度激素ABA对白藜芦醇及其衍生物含量及相关基因表达的影响 | 第70-72页 |
| 4.2.6 活体喷施激素后接种霜霉对白藜芦醇及其衍生物相关基因表达的影响 | 第72-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 圆叶葡萄品种'NOBLE'MRSTS和MRROMT共转化载体的构建及验证 | 第75-95页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-86页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第75页 |
| 5.1.2 实验仪器与设备 | 第75-76页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第76页 |
| 5.1.4 圆叶葡萄品种'Noble'MrSTS和MrROMT基因克隆 | 第76-77页 |
| 5.1.5 扩增产物的电泳检测、回收纯化 | 第77页 |
| 5.1.6 回收片段的连接克隆测序 | 第77页 |
| 5.1.7 MrSTS和MrROMT共转化双元表达载体的构建 | 第77-85页 |
| 5.1.8 MrSTS和MrROMT共转化双元表达载体的验证 | 第85-86页 |
| 5.1.9 统计分析 | 第86页 |
| 5.2 结果 | 第86-94页 |
| 5.2.1 圆叶葡萄品种'Noble'的MrSTS和MrROMT基因的克隆 | 第86-88页 |
| 5.2.2 P35S调控MrSTS和MrROMT共转化双元表达载体的构建 | 第88-89页 |
| 5.2.3 自身启动子调控MrSTS和MrROMT共转化双元表达载体的构建 | 第89-91页 |
| 5.2.4 烟草瞬时侵染GFP的荧光显微观察 | 第91-92页 |
| 5.2.5 烟草瞬时侵染后MrSTS和MrROMT基因表达 | 第92-93页 |
| 5.2.6 烟草瞬时侵染后白藜芦醇和紫檀芪含量 | 第93-94页 |
| 5.3 讨论 | 第94-95页 |
| 第六章 结论与展望 | 第95-97页 |
| 6.1 结论 | 第95-96页 |
| 6.2 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 附录 | 第111-126页 |
| 作者简介 | 第126页 |
