重金属Hg2+单克隆抗体的制备与ELISA检测方法研究
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 插图和附表清单 | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-33页 |
| ·重金属污染 | 第12-20页 |
| ·什么是重金属 | 第12-13页 |
| ·重金属对大气的污染 | 第13-14页 |
| ·重金属对水体的污染 | 第14页 |
| ·重金属对土壤的污染 | 第14-15页 |
| ·重金属污染的危害 | 第15-16页 |
| ·重金属污染的特点 | 第16页 |
| ·重金属污染的防治 | 第16-17页 |
| ·重金属汞污染 | 第17-20页 |
| ·重金属汞 | 第17-18页 |
| ·重金属汞的毒性 | 第18-19页 |
| ·重金属汞污染来源 | 第19-20页 |
| ·重金属汞污染的防治 | 第20页 |
| ·重金属残留的检测分析方法 | 第20-33页 |
| ·重金属污染的特点 | 第20-21页 |
| ·传统重金属检测方法 | 第21-24页 |
| ·化学方法 | 第22页 |
| ·物理方法 | 第22-23页 |
| ·生物分析法 | 第23-24页 |
| ·免疫学检测方法 | 第24-33页 |
| ·重金属检测的发展方向 | 第24页 |
| ·免疫分析法基础 | 第24-27页 |
| ·重金属完全抗原的研究 | 第27-28页 |
| ·双功能螯合剂 | 第28-29页 |
| ·金属离子-螯合剂抗原属性研究 | 第29-30页 |
| ·重金属免疫检测技术的研究 | 第30-32页 |
| ·研究重金属免疫检测技术的意义 | 第32-33页 |
| 2 重金属汞离子单克隆抗体制备及鉴定 | 第33-43页 |
| ·材料和常用试剂的配制 | 第33-36页 |
| ·主要试剂和材料 | 第33-36页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·主要仪器和材料 | 第33-34页 |
| ·主要化学与生化试剂 | 第34页 |
| ·常用试验溶液、主要培养液和缓冲液的配制 | 第34-36页 |
| ·重金属完全抗原的制备 | 第36-37页 |
| ·完全抗原的制备 | 第36-37页 |
| ·合成抗原的鉴定 | 第37页 |
| ·动物免疫 | 第37-38页 |
| ·间接 ELISA 法筛选小鼠 | 第38页 |
| ·细胞融合 | 第38-39页 |
| ·骨髓瘤细胞 SP2/0和小鼠脾细胞悬液的准备 | 第38-39页 |
| ·脾细胞与 Sp2/0细胞融合 | 第39页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第39-40页 |
| ·小鼠腹腔制备饲养细胞 | 第39-40页 |
| ·阳性细胞的亚克隆 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第41页 |
| ·杂交瘤细胞体外培养 | 第41页 |
| ·小鼠腹水的制备 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第41-42页 |
| ·杂交瘤细胞与 Sp2/0细胞融合鉴定 | 第42页 |
| ·单克隆抗体类型鉴定 | 第42页 |
| ·亲和常数的测定 | 第42页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体稳定性观察 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-51页 |
| ·抗原鉴定结果 | 第43-45页 |
| ·BCA 法抗原鉴定结果 | 第43页 |
| ·紫外光谱法抗原鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·抗原 SDS-PAGE 电泳 | 第44-45页 |
| ·小鼠抗体的检测结果 | 第45-47页 |
| ·细胞融合 | 第47页 |
| ·杂交瘤细胞株筛选 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞株染色体众数检测 | 第48-49页 |
| ·单抗亚类鉴定 | 第49页 |
| ·2C3细胞株稳定性检测 | 第49-50页 |
| ·单克隆抗体大量制备和效价检测 | 第50页 |
| ·腹水型单克隆抗体的纯化 | 第50-51页 |
| ·抗体的亲和力检测 | 第51页 |
| ·抗体特异性的测定 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| ·完全抗原的制备 | 第51-53页 |
| ·小鼠免疫方案 | 第53页 |
| ·细胞融合 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞筛选 | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第54页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第54-55页 |
| ·单抗亲和力检测 | 第55页 |
| ·单抗亲特异性检测 | 第55页 |
| 5 汞离子单抗制备小结 | 第55页 |
| 6 汞离子 ELISA 检测方法研究 | 第55-62页 |
| ·材料和试剂 | 第56页 |
| ·ELISA 最佳工作条件的建立及结果 | 第56-59页 |
| ·包被抗原和抗体的最佳工作浓度建立 | 第56-57页 |
| ·抗原包被时间的优化 | 第57-58页 |
| ·封闭试剂的选择 | 第58页 |
| ·离子强度对 CI-ELISA 的影响 | 第58页 |
| ·酸碱度对 CI-ELISA 的影响 | 第58-59页 |
| ·汞离子检测标准曲线建立及相关参数计算 | 第59-61页 |
| ·ELISA检测方法的结果与讨论 | 第61-62页 |
| ·ELISA 最佳工作条件的建立 | 第61页 |
| ·汞离子检测标准曲线建立 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
