| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·纤维素的研究进展 | 第11页 |
| ·纤维素酶的研究概况 | 第11-13页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第12-13页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的概述 | 第13-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的测定方法 | 第13-14页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第14-15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分子生物学研究 | 第15-16页 |
| ·酿酒酵母 | 第16-20页 |
| ·酿酒酵母 | 第16-17页 |
| ·酿酒酵母的表达系统 | 第17-20页 |
| ·本研究的背景及目的 | 第20-21页 |
| 第二章 三种不同β-葡萄糖苷酶基因克隆及序列分析 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·培养基和培养方法 | 第21-22页 |
| ·工具酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·需配试剂溶液 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·绿色木霉、黑曲霉和斜卧青霉的cDNA的合成 | 第24-26页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的扩增 | 第26-28页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的T-vector克隆 | 第28页 |
| ·快速小量制备大肠杆菌感受态及连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·快速菌落PCR鉴定阳性重组子 | 第29页 |
| ·大肠杆菌小量质粒提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的少量酶切鉴定 | 第30页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第30-31页 |
| ·结果和分析 | 第31-35页 |
| ·绿色木霉、黑曲霉和斜卧青霉的RNA的提取及其cDNA的获得 | 第31页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的测序结果及序列分析 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 三种β-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母AS2.489中的表达 | 第37-50页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·培养基和培养方法 | 第37页 |
| ·工具酶和试剂 | 第37页 |
| ·需配试剂溶液 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·胶回收DNA片段 | 第38-39页 |
| ·纤维素酶基因重组表达载体的构建 | 第39页 |
| ·酿酒酵母AS2.489对G418敏感性测定 | 第39-40页 |
| ·酿酒酵母的电转化 | 第40-41页 |
| ·酿酒酵母转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| ·筛选阳性重组酵母酶活较高的菌株 | 第42页 |
| ·重组酿酒酵母表达上清SDS-PAGE | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·三种β-葡萄糖苷酶基因表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·酿酒酵母AS2.489对G418敏感性测定 | 第44页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母转化子的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组酿酒酵母表达上清SDS-PAGE | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 三种重组β-葡萄糖苷酶的酶活检测及比较 | 第50-58页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·需配试剂溶液 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·酶活测定 | 第51页 |
| ·重组酵母转化株的最佳培养时间 | 第51页 |
| ·重组表达BGL Ⅰ最适反应pH实验 | 第51页 |
| ·重组表达BGL Ⅰ最适反应温度实验 | 第51-52页 |
| ·考马斯亮蓝测蛋白浓度 | 第52页 |
| ·酶活比较 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·重组酵母转化株的酶学性质的初步确定 | 第52-54页 |
| ·重组酵母转化株最适反应pH | 第54-55页 |
| ·重组酶的最适反应温度测定 | 第55-56页 |
| ·酶活比较 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 全文总结与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录一 Trichoderma viride strain AS3.3711 beta-D-glucoside glucohydrolase Ⅰ(bgl1)mRNA,complete cdsGenbank注册号FJ882071 | 第65-67页 |
| 附录二 Penicillium decumbens strain CICC 40361 beta-glucosidase Ⅰ(bgl1)mRNA,complete cds Genbank注册号GU320212 | 第67-69页 |
| 附录三 pGEM-T Easy载体图谱及多克隆位点 | 第69-70页 |
| 附四 缩略语 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学位论文和专利 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
