| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 缩略语表 | 第14-21页 |
| 第一章 文献综述:AChE作为选择性杀虫剂靶标的前景与挑战 | 第21-36页 |
| 1 引言 | 第21-22页 |
| 2 不同昆虫的AChE具有不同的特性及农药敏感性 | 第22-27页 |
| 3 同一种昆虫的两种AChE具有不同的催化特性及农药敏感性 | 第27页 |
| 4 AChE点突变引起的抗性 | 第27-29页 |
| 5 AChE的结构和功能分析 | 第29-34页 |
| ·AChE的催化三联体 | 第31页 |
| ·周边离子位点及其作为选择性杀虫剂或药物靶标的前瞻 | 第31-32页 |
| ·直接作用于AChE"后门"的新化合物 | 第32页 |
| ·昆虫2型AChE和其它动物AChE的结构差异 | 第32-33页 |
| ·脊椎动物和无脊椎动物酰基口袋和芳香族区域的差异 | 第33页 |
| ·基于AChE结构的差异设计选择性杀虫剂的例子 | 第33-34页 |
| 6 结论及展望 | 第34-36页 |
| 第二章 常用仪器、方法和试剂 | 第36-45页 |
| 1 常用实验仪器 | 第36-37页 |
| 2 常用实验方法 | 第37-42页 |
| ·CaCl_2法小量制备感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38-39页 |
| ·提取质粒DNA | 第39页 |
| ·酶切与连接反应 | 第39-40页 |
| ·Western blot方法 | 第40-41页 |
| ·Bradford蛋白定量法 | 第41页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第41-42页 |
| 3 常规实验试剂配制 | 第42-45页 |
| ·细菌培养基 | 第42页 |
| ·碱法质粒抽提液 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第42-43页 |
| ·Western blot试剂 | 第43页 |
| ·常用缓冲液 | 第43-44页 |
| ·RNA酶 | 第44页 |
| ·常用抗生素及诱导剂的配 | 第44-45页 |
| 第三章 不同蚕品种两种类型ace多态性分析 | 第45-60页 |
| 引言 | 第45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| ·实验动物 | 第45-46页 |
| ·药品试剂 | 第46页 |
| ·农药生物活性测定方法 | 第46页 |
| ·不同品种家蚕AChE的粗酶源活性及农药抑制活性分析 | 第46页 |
| ·不同品种家蚕AChE基因克隆、测序和分析 | 第46-47页 |
| ·不同品种AChE进化树的绘制 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-58页 |
| ·毒死蜱对不同品种家蚕的毒性及毒性机理分析 | 第48-49页 |
| ·残杀威对不同品种家蚕的毒性及毒性机理分析 | 第49-51页 |
| ·不同品种家蚕ace多态性分析 | 第51-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 第四章 蚕两种ace在不同发育阶段的差异表达及RNAi研究 | 第60-71页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| ·昆虫 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60-61页 |
| ·家蚕不同时期两种AChE mRNA表达水平分析 | 第61-63页 |
| ·RNAi研究 | 第63-65页 |
| 2 实验结果 | 第65-69页 |
| ·家蚕ace1,ace2基因在不同发育阶段的表达水平比较 | 第65-67页 |
| ·家蚕两种AChE基因的RNAi初步研究 | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 结论 | 第70-71页 |
| 第五章 野蚕两种ace克隆及其编码蛋白的催化特性和抑制动力学比较 | 第71-92页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 1 材料和方法 | 第72-78页 |
| ·昆虫及细胞 | 第72页 |
| ·药品和试剂 | 第72页 |
| ·基因克隆和序列分析 | 第72-74页 |
| ·野蚕两种AChE在昆虫细胞中表达 | 第74-75页 |
| ·序列比对及同源性分析 | 第75-76页 |
| ·AChE活性及动力学参数测定 | 第76-77页 |
| ·纯化大量表达的AChE | 第77-78页 |
| 2 实验结果 | 第78-89页 |
| ·野蚕两种AChE基因的克隆和序列分析 | 第78-79页 |
| ·真核转移载体的构建和重组Bacmid的获得 | 第79-80页 |
| ·Boma-ace1和Boma-ace2在细胞里的表达和检测 | 第80-81页 |
| ·蛋白的纯化 | 第81-82页 |
| ·AChE活性和动力学参数分析 | 第82-83页 |
| ·选择性抑制剂对Boma-AChE1和Boma-AChE2的抑制分析 | 第83-84页 |
| ·蚕两种类型AChE的抑制动力学分析 | 第84-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 4 结论 | 第91-92页 |
| 第六章 Es-ace克隆、抗性相关点突变分析及其与宿主2种AChE比较 | 第92-113页 |
| 引言 | 第92页 |
| 1 材料与方法 | 第92-98页 |
| ·昆虫 | 第92-93页 |
| ·菌株和细胞 | 第93页 |
| ·药品试剂 | 第93页 |
| ·基因克隆和分析 | 第93-94页 |
| ·追寄蝇Es-353G-AChE和Es-353A-AChE在昆虫细胞中表达 | 第94-96页 |
| ·AChE活性的测定和动力学实验 | 第96-97页 |
| ·纯化大量表达的AChE | 第97-98页 |
| 2 实验结果与分析 | 第98-111页 |
| ·追寄蝇AChE的基因序列分析 | 第98-102页 |
| ·Es-353A和Es-353G AChE基因在昆虫细胞中的表达 | 第102-105页 |
| ·家蚕追寄蝇天然AChE的纯化和酶学特性分析 | 第105-108页 |
| ·两种家蚕追寄蝇的活性和动力学参数比较 | 第108页 |
| ·4种抑制剂对两种重组家蚕追寄蝇AChE的抑制特性分析 | 第108-109页 |
| ·家蚕追寄蝇AChE与蚕的两种AChE的抑制动力学比较分析 | 第109-111页 |
| 3 讨论 | 第111-112页 |
| 4 结论 | 第112-113页 |
| 第七章 用生物反应器表达敏感型昆虫AChE及其在农药检测中的应用 | 第113-122页 |
| 引言 | 第113页 |
| 1 材料和方法 | 第113-115页 |
| ·材料和试剂 | 第113-114页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第114页 |
| ·AChE基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达 | 第114页 |
| ·SDS-PAGE和western杂交分析 | 第114页 |
| ·细胞在生物反应器中悬浮培养以及重组病毒感染 | 第114-115页 |
| ·AChE的纯化 | 第115页 |
| ·最适pH值和最适温度的测定 | 第115页 |
| ·AChE用于农药检测 | 第115页 |
| 2 结果与讨论 | 第115-120页 |
| ·敏感家蝇AChE在粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4中的表达 | 第115-116页 |
| ·Tn-5B1-4(High Five)细胞生物反应器培养的条件优化 | 第116页 |
| ·AChE在生物反应器中的表达 | 第116-119页 |
| ·AChE的纯化 | 第119页 |
| ·pH值和温度对AChE活性的影响 | 第119-120页 |
| ·用纯化的AChE检测农药残留 | 第120页 |
| 3 讨论 | 第120-121页 |
| 4 结论 | 第121-122页 |
| 第八章 总结与展望 | 第122-126页 |
| 1 主要结果和结论 | 第122-124页 |
| ·不同品种家蚕两种类型ace多态性分析 | 第122页 |
| ·家蚕两种类型AChE在不同幼虫龄期mRNA表达水平和RNAi影响 | 第122-123页 |
| ·Boma-AChEl和Boma-AChE2的基因克隆、表达及比较 | 第123页 |
| ·ES-AChE的催化特性及其与蚕两种类型AChE对农药敏感性比较分析 | 第123-124页 |
| ·用生物反应器表达昆虫AChE及其在农药检测中的应用 | 第124页 |
| 2 正在进行的工作 | 第124-125页 |
| ·蚕1型AChE的晶体结构研究 | 第124-125页 |
| ·利用表达的两种类型的AChE进行新农药筛选研究 | 第125页 |
| ·AChE1转基因果蝇研究 | 第125页 |
| 3 展望 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-139页 |
| 附录:作者读博期间科研项目经历及发表论文 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
