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人胎盘来源的MSCs与壳聚糖-IGF-1C水凝胶共移植通过分泌PGE2改善TNBS诱导的结肠炎

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
缩略语/符号说明第12-13页
前言第13-17页
    研究现状、成果第13-15页
    研究目的、方法第15-17页
一、实验材料与方法第17-38页
    1.1 实验材料第17-20页
        1.1.1 细胞第17页
        1.1.2 CS与CS-IGF-1C水凝胶第17页
        1.1.3 菌株及质粒第17页
        1.1.4 实验动物第17页
        1.1.5 主要实验试剂第17-18页
        1.1.6 试验用溶液的配置第18-19页
        1.1.7 主要实验仪器及材料第19-20页
    1.2 试验方法第20-38页
        1.2.1 人胎盘间充质干细胞的复苏、换液、传代及冻存第20-21页
            1.2.1.1 细胞的复苏第20页
            1.2.1.2 细胞的换液第20页
            1.2.1.3 细胞的传代第20页
            1.2.1.4 细胞的冻存第20-21页
        1.2.2 质粒的转化扩增第21页
        1.2.3 质粒的提取第21-22页
        1.2.4 慢病毒的包装第22-23页
        1.2.5 建立稳定的慢病毒表达细胞系第23页
            1.2.5.1 慢病毒感染人胎盘间充质干细胞第23页
            1.2.5.2 稳定细胞系的筛选第23页
        1.2.6 表达荧光素酶的细胞系成像第23页
        1.2.7 细胞增殖实验(CCK-8染色)第23-24页
        1.2.8 TNBS诱导的结肠炎小鼠模型的建立及随机分组第24页
        1.2.9 水凝胶/PBS与细胞共移植第24-25页
        1.2.10 小动物活体成像第25页
        1.2.11 生物学效应评估第25-30页
            1.2.11.1 体征观察及DAI评分第25-26页
            1.2.11.2 ROS成像第26页
            1.2.11.3 肠组织取材及疾病评分第26页
            1.2.11.4 石蜡切片第26-28页
            1.2.11.5 苏木素/伊红(ematoxylin-Eosin,HE)染色及组织学评分第28-29页
            1.2.11.6 冰冻切片第29页
            1.2.11.7 免疫荧光染色第29-30页
        1.2.12 炎症因子在肠组织基因水平的表达第30-33页
            1.2.12.1 肠组织总RNA提取第30-31页
            1.2.12.2 cDNA反转率第31页
            1.2.12.3 Real-timePCR第31-33页
        1.2.13 炎性因子在肠组织蛋白水平的检测第33-35页
            1.2.13.1 肠组织总蛋白的提取第33页
            1.2.13.2 蛋白浓度的测定及蛋白定量第33页
            1.2.13.3 蛋白印记第33-35页
        1.2.14 腹腔巨噬细胞的提取第35页
        1.2.15 细胞爬片及免疫荧光第35页
        1.2.16 ELISA第35-36页
        1.2.17 流式细胞分析第36-38页
二、结果实验结果与分析第38-57页
    2.1 PMSCs的特性第38-40页
        2.1.1 PMSCs的增殖能力及转染率第38页
        2.1.2 PMSCs的形态特征第38-39页
        2.1.3 PMSCs的鉴定第39页
        2.1.4 PMSCs体内示踪的条件第39-40页
    2.2 CS-IGF-1C水凝胶的生物学相容性第40-43页
        2.2.1 不同浓度的CS-IGF-1C水凝胶对细胞活性的影响第40-41页
        2.2.2 CS-IGF-1C水凝胶对PMSCs形态及表型的影响第41页
        2.2.3 CS-IGF-1C水凝胶体外促进PMSCs增殖第41-42页
        2.2.4 PMSCs促生长因子的表达第42-43页
    2.3 CS-IGF-1C水凝胶体内促进PMSCs的存活第43-45页
        2.3.1 PMSCs体内示踪第43-44页
        2.3.2 移植后细胞在组织内的检测第44-45页
    2.4 CS-IGF-1C水凝胶与PMSCs共移植生物学效应评估第45-48页
        2.4.1 减轻体重下降第45-46页
        2.4.2 降低DAI评分第46页
        2.4.3 改善结肠宏观表象第46-47页
        2.4.4 改善病理组织学特征第47-48页
    2.5 炎症反应评价第48-50页
        2.5.1 ROS含量测定第48-49页
        2.5.2 肠组织促炎因子表达水平的检测第49-50页
    2.6 炎症反应减轻其机制的探讨第50-53页
        2.6.1 抑炎因子表达上调第50-51页
        2.6.2 肠组织蛋白水平的检测第51-52页
        2.6.3 肠组织免疫荧光检测第52页
        2.6.4 腹腔巨噬细胞免疫荧光检测第52-53页
    2.7 M2型巨噬细胞极化机制的探讨第53-57页
        2.7.1 ELISA检测PMSCs条件培养基中PGE2的含量第53-54页
        2.7.2 ELISA检测PGE2的最适浓度第54页
        2.7.3 免疫荧光检测PGE2下调iNOS的表达第54-55页
        2.7.4 免疫荧光检测PGE2诱导CD206的表达第55-57页
三、讨论第57-60页
结论第60-61页
论文创新点第61-62页
参考文献第62-70页
发表论文情况说明第70-71页
综述 MSCs在IBD治疗中移植方式及有效性比较第71-80页
    综述参考文献第76-80页
致谢第80-82页
个人简历第82页

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