中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
缩略语/符号说明 | 第12-13页 |
前言 | 第13-17页 |
研究现状、成果 | 第13-15页 |
研究目的、方法 | 第15-17页 |
一、实验材料与方法 | 第17-38页 |
1.1 实验材料 | 第17-20页 |
1.1.1 细胞 | 第17页 |
1.1.2 CS与CS-IGF-1C水凝胶 | 第17页 |
1.1.3 菌株及质粒 | 第17页 |
1.1.4 实验动物 | 第17页 |
1.1.5 主要实验试剂 | 第17-18页 |
1.1.6 试验用溶液的配置 | 第18-19页 |
1.1.7 主要实验仪器及材料 | 第19-20页 |
1.2 试验方法 | 第20-38页 |
1.2.1 人胎盘间充质干细胞的复苏、换液、传代及冻存 | 第20-21页 |
1.2.1.1 细胞的复苏 | 第20页 |
1.2.1.2 细胞的换液 | 第20页 |
1.2.1.3 细胞的传代 | 第20页 |
1.2.1.4 细胞的冻存 | 第20-21页 |
1.2.2 质粒的转化扩增 | 第21页 |
1.2.3 质粒的提取 | 第21-22页 |
1.2.4 慢病毒的包装 | 第22-23页 |
1.2.5 建立稳定的慢病毒表达细胞系 | 第23页 |
1.2.5.1 慢病毒感染人胎盘间充质干细胞 | 第23页 |
1.2.5.2 稳定细胞系的筛选 | 第23页 |
1.2.6 表达荧光素酶的细胞系成像 | 第23页 |
1.2.7 细胞增殖实验(CCK-8染色) | 第23-24页 |
1.2.8 TNBS诱导的结肠炎小鼠模型的建立及随机分组 | 第24页 |
1.2.9 水凝胶/PBS与细胞共移植 | 第24-25页 |
1.2.10 小动物活体成像 | 第25页 |
1.2.11 生物学效应评估 | 第25-30页 |
1.2.11.1 体征观察及DAI评分 | 第25-26页 |
1.2.11.2 ROS成像 | 第26页 |
1.2.11.3 肠组织取材及疾病评分 | 第26页 |
1.2.11.4 石蜡切片 | 第26-28页 |
1.2.11.5 苏木素/伊红(ematoxylin-Eosin,HE)染色及组织学评分 | 第28-29页 |
1.2.11.6 冰冻切片 | 第29页 |
1.2.11.7 免疫荧光染色 | 第29-30页 |
1.2.12 炎症因子在肠组织基因水平的表达 | 第30-33页 |
1.2.12.1 肠组织总RNA提取 | 第30-31页 |
1.2.12.2 cDNA反转率 | 第31页 |
1.2.12.3 Real-timePCR | 第31-33页 |
1.2.13 炎性因子在肠组织蛋白水平的检测 | 第33-35页 |
1.2.13.1 肠组织总蛋白的提取 | 第33页 |
1.2.13.2 蛋白浓度的测定及蛋白定量 | 第33页 |
1.2.13.3 蛋白印记 | 第33-35页 |
1.2.14 腹腔巨噬细胞的提取 | 第35页 |
1.2.15 细胞爬片及免疫荧光 | 第35页 |
1.2.16 ELISA | 第35-36页 |
1.2.17 流式细胞分析 | 第36-38页 |
二、结果实验结果与分析 | 第38-57页 |
2.1 PMSCs的特性 | 第38-40页 |
2.1.1 PMSCs的增殖能力及转染率 | 第38页 |
2.1.2 PMSCs的形态特征 | 第38-39页 |
2.1.3 PMSCs的鉴定 | 第39页 |
2.1.4 PMSCs体内示踪的条件 | 第39-40页 |
2.2 CS-IGF-1C水凝胶的生物学相容性 | 第40-43页 |
2.2.1 不同浓度的CS-IGF-1C水凝胶对细胞活性的影响 | 第40-41页 |
2.2.2 CS-IGF-1C水凝胶对PMSCs形态及表型的影响 | 第41页 |
2.2.3 CS-IGF-1C水凝胶体外促进PMSCs增殖 | 第41-42页 |
2.2.4 PMSCs促生长因子的表达 | 第42-43页 |
2.3 CS-IGF-1C水凝胶体内促进PMSCs的存活 | 第43-45页 |
2.3.1 PMSCs体内示踪 | 第43-44页 |
2.3.2 移植后细胞在组织内的检测 | 第44-45页 |
2.4 CS-IGF-1C水凝胶与PMSCs共移植生物学效应评估 | 第45-48页 |
2.4.1 减轻体重下降 | 第45-46页 |
2.4.2 降低DAI评分 | 第46页 |
2.4.3 改善结肠宏观表象 | 第46-47页 |
2.4.4 改善病理组织学特征 | 第47-48页 |
2.5 炎症反应评价 | 第48-50页 |
2.5.1 ROS含量测定 | 第48-49页 |
2.5.2 肠组织促炎因子表达水平的检测 | 第49-50页 |
2.6 炎症反应减轻其机制的探讨 | 第50-53页 |
2.6.1 抑炎因子表达上调 | 第50-51页 |
2.6.2 肠组织蛋白水平的检测 | 第51-52页 |
2.6.3 肠组织免疫荧光检测 | 第52页 |
2.6.4 腹腔巨噬细胞免疫荧光检测 | 第52-53页 |
2.7 M2型巨噬细胞极化机制的探讨 | 第53-57页 |
2.7.1 ELISA检测PMSCs条件培养基中PGE2的含量 | 第53-54页 |
2.7.2 ELISA检测PGE2的最适浓度 | 第54页 |
2.7.3 免疫荧光检测PGE2下调iNOS的表达 | 第54-55页 |
2.7.4 免疫荧光检测PGE2诱导CD206的表达 | 第55-57页 |
三、讨论 | 第57-60页 |
结论 | 第60-61页 |
论文创新点 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-70页 |
发表论文情况说明 | 第70-71页 |
综述 MSCs在IBD治疗中移植方式及有效性比较 | 第71-80页 |
综述参考文献 | 第76-80页 |
致谢 | 第80-82页 |
个人简历 | 第82页 |