| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词表 Lists of abbreviaion | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-21页 |
| 1.1 AST家族神经肽的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.1 AST家族神经肽的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 AST家族神经肽的功能 | 第16-17页 |
| 1.2 AST-A对生殖的调控作用 | 第17-20页 |
| 1.2.1 保幼激素的合成 | 第17-18页 |
| 1.2.2 保幼激素的生理学作用 | 第18-19页 |
| 1.2.3 甲基法尼酯的合成 | 第19页 |
| 1.2.4 甲基法尼酯的生理功能 | 第19-20页 |
| 1.2.5 AST-A对生殖的调控机制 | 第20页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 拟穴青蟹AST-A神经内分泌研究 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| 2.2.4 SpAST-A片段序列的克隆和测序 | 第25-28页 |
| 2.2.5 SpAST-A序列分析和系统进化树的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.6 SpAST-A基因在拟穴青蟹不同组织中的表达分析 | 第29页 |
| 2.2.7 SpAST-A基因在拟穴青蟹不同发育期的脑神经节中的表达分析 | 第29页 |
| 2.2.8 内参基因的选择 | 第29页 |
| 2.2.9 SpAST-A基因的实时定量检测 | 第29-30页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第30-31页 |
| 2.2.11 原位杂交探针的合成 | 第31-34页 |
| 2.2.12 石蜡切片的制作 | 第34-35页 |
| 2.2.13 原位杂交 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-42页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.2 SpAST-A基因的鉴定 | 第37-40页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR条件确立 | 第40页 |
| 2.3.4 SpAST-A基因在拟穴青蟹不同组织中的表达分析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 SpAST-A基因在拟穴青蟹不同发育期的脑神经节中的表达分析 | 第41-42页 |
| 2.3.6 SpAST-A基因在脑神经节中的原位杂交定位 | 第42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 拟穴青蟹AST-A生殖自分泌研究 | 第45-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第45页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第45页 |
| 3.1.3 主要仪器试剂 | 第45页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-56页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第45-46页 |
| 3.2.2 总RNA的提取及cDNA的制备 | 第46页 |
| 3.2.3 SpAST-AR基因cDNA片段获得 | 第46-47页 |
| 3.2.4 SpAST-AR序列分析和系统进化树的构建 | 第47页 |
| 3.2.5 SpAST-A和SpAST-AR基因在不同发育期卵巢的表达分析 | 第47页 |
| 3.2.6 原位杂交探针的合成 | 第47-49页 |
| 3.2.7 SpASTA、SpAST-AR在卵巢中的原位杂交定位 | 第49-50页 |
| 3.2.8 AST-A小肽添加实验 | 第50-51页 |
| 3.2.9 dsAST-AR、dsGFP的体外合成 | 第51-53页 |
| 3.2.10 体外干扰AST-AR基因预实验 | 第53-54页 |
| 3.2.11 体外干扰AST-AR基因后添加小肽的实验 | 第54-56页 |
| 3.3 实验结果 | 第56-66页 |
| 3.3.1 总RNA的提取 | 第56页 |
| 3.3.2 SpAST-AR基因的鉴定 | 第56-59页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR条件确立 | 第59-60页 |
| 3.3.4 SpAST-A和SpAST-AR基因在不同发育期卵巢中的表达分析 | 第60-61页 |
| 3.3.5 SpAST-A和SpAST-AR基因在卵巢中的原位杂交定位 | 第61-62页 |
| 3.3.6 SpAST-A小肽对卵巢发育的影响 | 第62-64页 |
| 3.3.7 体外干扰AST-AR基因的预实验 | 第64-65页 |
| 3.3.8 体外干扰AST-AR基因后添加小肽检测相关基因 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-69页 |
| 第四章 结语 | 第69-71页 |
| 4.1 总结 | 第69-70页 |
| 4.1.1 AST-A的神经内分泌 | 第69页 |
| 4.1.2 AST-A的生殖自分泌 | 第69-70页 |
| 4.2 创新点 | 第70页 |
| 4.3 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
