| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 HNFs肝细胞核因子家族 | 第12-17页 |
| 1.1.1 HNFs肝细胞核因子家族简介 | 第12页 |
| 1.1.2 HNFs分类及其结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 HNF家族在肝脏发育过程中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 HNF4α(肝细胞核因子4α) | 第14-17页 |
| 1.2 Hippo信号通路 | 第17-23页 |
| 1.2.1 Hippo信号通路的发现及主要结构 | 第17-19页 |
| 1.2.2 Hippo信号通路中YAP/TAZ的调控及功能 | 第19-20页 |
| 1.2.3 Hippo信号通路各组分与癌症 | 第20-22页 |
| 1.2.4 Hippo信号通路组分与肝细胞癌 | 第22-23页 |
| 1.3 肝细胞癌 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-45页 |
| 2.1 常用药品与试剂 | 第25页 |
| 2.2 分子克隆相关实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 质粒转化 | 第26页 |
| 2.2.3 质粒DNA小提中量 | 第26-27页 |
| 2.2.4 质粒构建 | 第27-29页 |
| 2.3 细胞相关实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 细胞系 | 第29页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.3.3 细胞复苏 | 第30页 |
| 2.3.4 细胞传代 | 第30页 |
| 2.3.5 细胞冻存 | 第30页 |
| 2.3.6 PEI转染法(10cm盘为例) | 第30-31页 |
| 2.3.7 TurboFect转染法(以六孔板为例) | 第31页 |
| 2.3.8 慢病毒的包装与感染 | 第31-32页 |
| 2.3.9 Lipofectamine 3000转染试剂转染(以六孔板为例) | 第32页 |
| 2.3.10 腺病毒的包装与纯化 | 第32-33页 |
| 2.4 细胞蛋白及RNA相关实验方法 | 第33-41页 |
| 2.4.1 细胞蛋白相关实验 | 第33-36页 |
| 2.4.2 RNA相关实验 | 第36-39页 |
| 2.4.3 luciferase实验(以24孔板为例) | 第39-40页 |
| 2.4.4 Ch-IP实验 | 第40-41页 |
| 2.5 动物模型相关实验 | 第41-44页 |
| 2.5.1 DEN诱导大鼠肝癌模型的构建 | 第41页 |
| 2.5.2 尾静脉注射腺病毒 | 第41-42页 |
| 2.5.3 大(小)鼠肝脏组织样品蛋白提取 | 第42页 |
| 2.5.4 大(小)鼠肝脏组织样品总RNA提取 | 第42页 |
| 2.5.5 大(小)鼠肝脏组织样品免疫组化实验 | 第42-44页 |
| 2.6 全文统计学分析方法 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-57页 |
| 3.1 HNF4α与YAP1的表达在多种肝癌细胞系中呈现明显的负相关 | 第45-46页 |
| 3.2 HNF4α与YAP1竞争性结合TEAD从而抑制YAP1-TEAD的下游靶基因表达水平 | 第46-51页 |
| 3.2.1 TEAD1和TEAD4在肝细胞癌中起主要作用 | 第46-47页 |
| 3.2.2 过表达的HNF4α抑制YAP1-TEAD1的结合 | 第47-48页 |
| 3.2.3 敲减HNF4α增强了YAP1-TEAD4的结合 | 第48-49页 |
| 3.2.4 敲减HNF4α促进了CTGF promoter调控的luciferase活性 | 第49-50页 |
| 3.2.5 HNF4α通过TEADs结合到YAP-TEAD下游靶基因的promoter上 | 第50-51页 |
| 3.3 DEN诱导大鼠肝癌模型中过表达HNF4α能有效抑制YAP1-TEAD下游靶基因的表达量 | 第51-53页 |
| 3.4 HNF4α能有效抑制mst1/2 double-mutant小鼠的肝癌进展 | 第53-57页 |
| 3.4.1 HNF4α抑制mst1/2 double-mutant小鼠肝脏的肿大和成瘤 | 第54页 |
| 3.4.2 HNF4α回调mst1/2 double-mutant小鼠肝脏中上调的YAP1-TEAD下游靶基因 | 第54-56页 |
| 3.4.3 HNF4α抑制mst1/2 double-mutant小鼠肝脏的增殖能力 | 第56-57页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
