| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 上篇 引言 | 第12-21页 |
| 1 芒果概况 | 第12页 |
| 2 芒果炭疽病研究概况 | 第12-16页 |
| 2.1 症状特点 | 第12-13页 |
| 2.2 病原菌 | 第13页 |
| 2.3 病害发生特点 | 第13-14页 |
| 2.4 防治 | 第14页 |
| 2.4.1 选用抗病品种 | 第14页 |
| 2.4.2 化学防治 | 第14页 |
| 2.4.3 生物防治 | 第14页 |
| 2.5 胶胞炭疽菌分子生物学特性 | 第14-16页 |
| 3 小柱孢酮脱水酶基因SCD和羟基萘还原酶基因THR研究概况 | 第16-19页 |
| 3.1 小柱孢酮脱水酶基因SCD | 第17-18页 |
| 3.2 羟基萘还原酶基因 | 第18-19页 |
| 4 本研究目的意义、主要研究内容和技术路线 | 第19-21页 |
| 4.1 目的意义 | 第19-20页 |
| 4.2 主要研究内容 | 第20页 |
| 4.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 下篇 研究内容 | 第21-69页 |
| 1 材料与方法 | 第21-35页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.1 供试材料 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.3 培养基 | 第22页 |
| 1.1.4主要仪器 | 第22页 |
| 1.2方法 | 第22-35页 |
| 1.2.1 小柱孢酮脱水酶基因SCD1和羟基萘还原酶基因THR1全长DNA片段扩增 | 第22-25页 |
| 1.2.2 小柱孢酮脱水酶基因SCD1和羟基萘还原酶基因THR1全长cDNA序列的获得 | 第25-27页 |
| 1.2.3 SCD1基因和THR1基因敲除载体的构建 | 第27-29页 |
| 1.2.4 SCD1基因和THR1基因敲除 | 第29-31页 |
| 1.2.5 转化子的纯化和检测 | 第31-32页 |
| 1.2.6 突变体△A2SCD1-1和△A2THR1-1表型测定 | 第32-34页 |
| 1.2.7 突变体△A2SCD1-1和△A2THR1-1酶活及胞内黑色素含量测定 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-63页 |
| 2.1 小柱孢酮脱水酶基因SCD1与羟基萘还原酶基因THR1片段扩增 | 第35-41页 |
| 2.1.1 病原菌A2基因组DNA和RNA的提取 | 第35页 |
| 2.1.2 SCD1基因的DNA、cDNA片段扩增及序列分析 | 第35-38页 |
| 2.1.3 THR1基因的DNA、cDNA片段扩增及序列分析 | 第38-41页 |
| 2.2 SCD1与THR1的基因敲除 | 第41-46页 |
| 2.2.1 SCD1基因敲除载体构建 | 第41页 |
| 2.2.2 THR1基因敲除载体构建 | 第41-42页 |
| 2.2.3 小柱孢酮脱水酶基因SCD1与羟基萘还原酶基因THR1基因的敲除 | 第42-43页 |
| 2.2.4 SCD1和THR1基因敲除突变体筛选 | 第43-46页 |
| 2.3 SCD1基因与THR1基因突变型测定 | 第46-55页 |
| 2.3.1 突变体对潮霉素抗性的遗传稳定性检测 | 第46页 |
| 2.3.2 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1菌落、菌丝形态 | 第46-47页 |
| 2.3.3 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1生长速率 | 第47-48页 |
| 2.3.4 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1产孢量测定及孢子萌发观察 | 第48-50页 |
| 2.3.5 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1生长温度范围的测定 | 第50-51页 |
| 2.3.6 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1菌丝致死温度的测定 | 第51页 |
| 2.3.7 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1对pH条件的敏感性测定 | 第51页 |
| 2.3.8 突变体△A2SCD1-1与△A2THR1-1对高渗胁迫条件敏感性的测定 | 第51-52页 |
| 2.3.9 突变体△A2SCD1-1、△A2THR1-1对H_2O_2的敏感性测定 | 第52-53页 |
| 2.3.10 氮源和碳源对突变体△A2SCD1-1和△A2THR1-1菌丝生长的影响 | 第53-55页 |
| 2.4 突变体△A2SCD1-1和△A2THR1-1致病力测定 | 第55-61页 |
| 2.4.1 接种芒果果皮 | 第55-56页 |
| 2.4.2 刺伤接种古铜期叶片 | 第56-57页 |
| 2.4.3 刺伤接种淡绿期叶片 | 第57-58页 |
| 2.4.4 未刺伤接种古铜期叶片 | 第58-59页 |
| 2.4.5 未刺伤接种淡绿期叶片 | 第59-61页 |
| 2.5 突变体△A2SCD1-1、△A2THR1-1黑色素含量和酶活测定 | 第61-63页 |
| 2.5.1 胞内黑色素含量测定 | 第61页 |
| 2.5.2 细胞壁降解酶活性测定 | 第61-63页 |
| 3 讨论与结论 | 第63-69页 |
| 3.1 讨论 | 第63-65页 |
| 3.2 主要结论 | 第65-67页 |
| 3.2.1 获得芒果炭疽病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD1全长DNA和cDNA序列 | 第65-66页 |
| 3.2.2 获得芒果炭疽病菌羟基萘还原酶基因THR1全长DNA和cDNA序列 | 第66页 |
| 3.2.3 获得了芒果炭疽病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD1敲除突变体 | 第66页 |
| 3.2.4 获得了芒果炭疽病菌羟基萘还原酶基因THR1敲除突变体 | 第66页 |
| 3.2.5 小柱孢酮脱水酶基因SCD1突变体△A2SCD1-1的表型测定 | 第66-67页 |
| 3.2.6 羟基萘还原酶基因THR1突变体△A2THR1-1的表型测定 | 第67页 |
| 3.3 本研究创新点 | 第67页 |
| 3.4 后续研究 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 缩略词表 | 第75-76页 |
| 附录1.芒果炭疽病菌(C.gloeosporioides)小柱孢酮脱水酶基因SCD1的DNA与cDNA序列比对 | 第76-79页 |
| 附录2.芒果炭疽病菌(C gloeosporioides)小柱孢酮脱水酶基因SCD1推测编码氨基酸序列 | 第79-80页 |
| 附录3.芒果炭疽病菌(C.gloeosporioides)羟基萘还原酶基因THR1的DNA与cDNA序列比对 | 第80-82页 |
| 附录4.芒果炭疽病菌(C.gloeosporioides)羟基萘还原酶基因THR1推测编码氨基酸序列 | 第82-83页 |
| 附录5.植物病原真菌小柱孢酮脱水酶基因SCD编码氨基酸序列比对 | 第83-84页 |
| 附录6.攻读硕士期间论文发表和参与科研情况 | 第84-85页 |
| 附录7.资助项目 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
