| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1.1 他汀类药物 | 第13-15页 |
| 1.1.1 他汀类药物作用机理 | 第14-15页 |
| 1.2 生物催化合成他汀侧链的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 以(S/R)-5-羟基-3-羰基己酸醋为底物 | 第16-17页 |
| 1.2.2 以(3,5)-二羰基己酸酯为底物 | 第17-18页 |
| 1.3 生物催化中辅酶循环再生 | 第18-20页 |
| 1.3.1 酶法辅酶再生 | 第19-20页 |
| 1.4 双底物双产物酶催化反应动力学 | 第20-26页 |
| 1.4.1 顺序反应机制 | 第21-23页 |
| 1.4.1.1 有序顺序反应机制 | 第22-23页 |
| 1.4.1.2 随机顺序反应机制 | 第23页 |
| 1.4.2 顺序反应机制动力学 | 第23-26页 |
| 1.4.2.1 顺序反应动力学方程 | 第23-24页 |
| 1.4.2.2 产物抑制动力学 | 第24-26页 |
| 1.4.3 乒乓反应机制 | 第26页 |
| 1.4.4 乒乓反应机制动力学 | 第26页 |
| 1.5 本文研究的思路和方法 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-34页 |
| 第二章 羰基还原酶、葡萄糖脱氢酶菌株的发酵培养 | 第34-44页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 菌株 | 第34页 |
| 2.2.2 实验仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 | 第35页 |
| 2.2.4 培养基成分 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第36页 |
| 2.3.2 细胞生长测定 | 第36页 |
| 2.3.3 生物量的测定 | 第36页 |
| 2.3.4 菌体细胞超声破碎 | 第36页 |
| 2.3.5 比酶活(Specific activity)的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.5.1 羰基还原酶(Carbonyl reductase,CR)酶活的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.5.2 葡萄糖脱氢酶(Glucose dehydrogenase,GDH)酶活的测定 | 第37页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第37-42页 |
| 2.4.1 标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 2.4.2 种子生长曲线的确定 | 第38-39页 |
| 2.4.3 接种量的确定 | 第39页 |
| 2.4.4 诱导剂加入时间的确定 | 第39-40页 |
| 2.4.5 诱导温度的确定 | 第40-41页 |
| 2.4.6 诱导剂终浓度的确定 | 第41页 |
| 2.4.7 诱导表达时间对酶活的影响 | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 第三章 生物法不对称还原合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的研究 | 第44-61页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 菌株 | 第45页 |
| 3.2.2 实验仪器设备 | 第45页 |
| 3.2.3 实验药品及试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.4 培养基成分 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第46页 |
| 3.3.2 静息细胞的制备 | 第46页 |
| 3.3.3 菌体细胞超声破碎 | 第46页 |
| 3.3.4 反应产物光学纯度及转化率的测定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 分析方法 | 第47页 |
| 3.3.6 生物法不对称还原生产6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的研究 | 第47-50页 |
| 3.3.6.1 底物浓度的选择 | 第47-48页 |
| 3.3.6.2 双菌质量比对不对称还原的影响 | 第48页 |
| 3.3.6.3 菌体总浓度对不对称还原的影响 | 第48页 |
| 3.3.6.4 温度对不对称还原的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.6.5 pH对不对称还原的影响 | 第49页 |
| 3.3.6.6 辅酶(NADP+)浓度对不对称还原的影响 | 第49页 |
| 3.3.6.7 葡萄糖浓度对不对称还原的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.6.8 细胞冻干对不对称还原的影响 | 第50页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第50-59页 |
| 3.4.1 标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| 3.4.2 底物浓度的选择 | 第51-52页 |
| 3.4.3 双菌质量比对不对称还原的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 菌体总浓度对不对称还原的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.5 温度对不对称还原的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.6 pH对不对称还原的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.7 辅酶(NADP+)浓度对不对称还原的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.8 葡萄糖浓度对不对称还原的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.9 细胞冻干对不对称还原的影响 | 第58-59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-61页 |
| 第四章 羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶协同催化(R)-1不对称还原反应的酶动力学研究 | 第61-80页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.2.1 菌株 | 第61-62页 |
| 4.2.2 实验仪器设备 | 第62页 |
| 4.2.3 实验药品及试剂 | 第62页 |
| 4.2.4 培养基成分 | 第62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-68页 |
| 4.3.1 培养方法 | 第62页 |
| 4.3.2 静息细胞的制备 | 第62页 |
| 4.3.3 菌体细胞超声波破碎 | 第62页 |
| 4.3.4 蛋白浓度的测定 | 第62-63页 |
| 4.3.5 反应初速度的测定 | 第63页 |
| 4.3.5.1 羰基还原酶(Carbonyl reductase,CR)反应初速度的测定 | 第63页 |
| 4.3.5.2 葡萄糖脱氢酶(Glucose dehydrogenase,GDH)酶活的测定 | 第63页 |
| 4.3.6 羰基还原酶产物抑制研究 | 第63-64页 |
| 4.3.7 数学模型建立及数据分析处理 | 第64-68页 |
| 4.3.7.1 双底物酶促反应动力学方程推导 | 第64-67页 |
| 4.3.7.2 产物抑制动力学机理 | 第67-68页 |
| 4.3.7.3 双酶耦联模型推导 | 第68页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第68-78页 |
| 4.4.1 标准曲线绘制 | 第68-69页 |
| 4.4.2 羰基还原酶催化(R)-1不对称还原反应动力学常数的测定 | 第69-71页 |
| 4.4.2.1 初始底物浓度对反应初速度的影响 | 第69页 |
| 4.4.2.2 双倒数作图求解K_i~A | 第69-70页 |
| 4.4.2.3 二次作图求解动力学参数K_m~A、1/V_(max)、K_m~B | 第70-71页 |
| 4.4.2.4 羰基还原酶催化(R)-1不对称还原反应初速度曲线拟合 | 第71页 |
| 4.4.3 羰基还原酶产物抑制动力学研究 | 第71-73页 |
| 4.4.4 葡萄糖脱氢酶酶催化(R)-1不对称还原反应动力学常数的测定 | 第73-76页 |
| 4.4.4.1 初始底物浓度对反应初速度的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.4.2 双倒数作图求解K_i~A | 第74页 |
| 4.4.4.3 二次作图求解动力学参数K_m~A、1/V_(max)、K_m~B | 第74-75页 |
| 4.4.4.4 葡萄糖脱氢酶氧化葡萄糖反应初速度曲线拟合 | 第75-76页 |
| 4.4.5 双酶耦联辅酶循环再生催化(R)-1还原反应动力学 | 第76-78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 第五章 结论与展望 | 第80-83页 |
| 5.1 结论 | 第80-81页 |
| 5.2 展望 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
