棘孢青霉右旋糖酐酶基因克隆、表达及酶学研究
| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第16-27页 |
| 1.1 右旋糖酐酶简介 | 第16页 |
| 1.2 右旋糖酐酶分类 | 第16-17页 |
| 1.2.1 IUB-MB分类 | 第16页 |
| 1.2.2 习惯性分类法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 CAZy数据库分类 | 第17页 |
| 1.3 右旋糖酐酶的结构及催化机制 | 第17-18页 |
| 1.4 右旋糖酐酶来源 | 第18-21页 |
| 1.5 右旋糖酐酶基因克隆表达 | 第21-23页 |
| 1.5.1 大肠杆菌表达体系 | 第21-22页 |
| 1.5.2 毕赤酵母表达体系 | 第22-23页 |
| 1.5.3 酿酒酵母表达体系 | 第23页 |
| 1.6 右旋糖酐酶应用 | 第23-25页 |
| 1.6.1 在医药工业的应用 | 第23-24页 |
| 1.6.2 在食品工业的应用 | 第24-25页 |
| 1.6.3 在工业上的应用 | 第25页 |
| 1.7 本课题研究意义 | 第25页 |
| 1.8 研究内容与思路 | 第25-27页 |
| 第二章 右旋糖酐酶基因合成及密码子优化 | 第27-37页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 主要仪器与试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第28页 |
| 2.2.3 质粒与菌株 | 第28-29页 |
| 2.2.4 培养基 | 第29页 |
| 2.2.5 相关试剂配制 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 右旋糖酐酶活力的测定方法 | 第29-30页 |
| 2.3.2 棘孢青霉右旋糖酐酶的发酵培养 | 第30页 |
| 2.3.3 右旋糖酐酶总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.4 cDNA第一链合成 | 第30-31页 |
| 2.3.5 PCR扩增右旋糖酐酶基因 | 第31-32页 |
| 2.3.6 pMD-18T质粒提取 | 第32页 |
| 2.3.7 连接及转化 | 第32页 |
| 2.3.8 重组质粒筛选 | 第32页 |
| 2.3.9 密码子优化 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.4.1 右旋糖酐酶基因的合成 | 第33-34页 |
| 2.4.2 筛选重组质粒 | 第34页 |
| 2.4.3 右旋糖酐酶基因优化 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 重组毕赤酵母的构建 | 第37-52页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 主要仪器与试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 质粒与菌株 | 第39页 |
| 3.2.4 培养基 | 第39页 |
| 3.2.5 相关试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第40页 |
| 3.3.2 重组质粒构建 | 第40-43页 |
| 3.3.3 重组表达质粒筛选 | 第43-44页 |
| 3.3.4 重组酵母构建 | 第44-45页 |
| 3.3.5 重组酵母筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.6 重组酵母表达 | 第46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.4.1 重组质粒构建 | 第46-47页 |
| 3.4.2 重组质粒筛选 | 第47-49页 |
| 3.4.3 重组酵母构建 | 第49-50页 |
| 3.4.4 重组酵母表达 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 重组毕赤酵母发酵条件优化 | 第52-61页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-55页 |
| 4.2.1 主要仪器与试剂 | 第52-54页 |
| 4.2.2 培养基及试剂的配制 | 第54页 |
| 4.2.3 相关试剂配制 | 第54-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.3.1 菌株的培养方法 | 第55页 |
| 4.3.2 粗酶液的酶活检测方法 | 第55页 |
| 4.3.3 重组酵母发酵条件优化 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 重组右旋糖酐酶的分离纯化与酶学性质 | 第61-73页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料 | 第61-64页 |
| 5.2.1 菌株来源 | 第61页 |
| 5.2.2 主要仪器与试剂 | 第61-63页 |
| 5.2.3 培养基及试剂的配制 | 第63-64页 |
| 5.3 实验方法 | 第64-66页 |
| 5.3.1 右旋糖酐酶的分离纯化 | 第64-65页 |
| 5.3.2 重组右旋糖酐酶的酶学性质 | 第65-66页 |
| 5.4 结果与分析 | 第66-72页 |
| 5.4.1 右旋糖酐酶的分离纯化 | 第66-67页 |
| 5.4.2 右旋糖酐酶的酶学性质 | 第67-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 结论 | 第73页 |
| 6.2 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第83-84页 |
