| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 肠道病毒71型的研究现状 | 第11-18页 |
| 1.1.1 肠道病毒71型的病原学特征 | 第11-13页 |
| 1.1.2 肠道病毒71型的致病特点 | 第13-14页 |
| 1.1.3 EV71的基因分型 | 第14-15页 |
| 1.1.4 EV71的流行病学特点 | 第15页 |
| 1.1.5 EV71所致的HFMD流行概况 | 第15-16页 |
| 1.1.6 EV71所致疾病的防治 | 第16-18页 |
| 1.2 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) | 第18-23页 |
| 1.2.1 重组酶聚合酶扩增技术原理 | 第18-19页 |
| 1.2.2 RPA技术扩增结果的判定 | 第19-21页 |
| 1.2.3 RPA技术的应用 | 第21-23页 |
| 1.3 肠道病毒71型常用检测方法 | 第23-24页 |
| 1.3.1 病毒分离培养 | 第23页 |
| 1.3.2 血清学检测 | 第23-24页 |
| 1.3.3 分子生物学检测 | 第24页 |
| 1.4 本研究的意义和主要内容 | 第24-25页 |
| 第二章 肠道病毒71型RT-RPA检测方法的建立与评价 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 实验仪器和耗材 | 第26页 |
| 2.1.3 主要溶液和试剂的配置 | 第26-27页 |
| 2.1.4 实验样本来源 | 第27页 |
| 2.2 引物和探针的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.3 RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.4 质粒的构建和体外转录 | 第29-35页 |
| 2.4.1 cDNA的制备 | 第29页 |
| 2.4.2 PCR扩增VP1片段 | 第29-30页 |
| 2.4.3 纯化PCR产物 | 第30-31页 |
| 2.4.4 VP1片段与载体连接 | 第31页 |
| 2.4.5 转化感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.4.6 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 2.4.7 重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.4.8 酶切 | 第33页 |
| 2.4.9 体外转录合成RNA | 第33-35页 |
| 2.4.10 样本RNA标准品的制备 | 第35页 |
| 2.5 RT-RPA反应条件 | 第35页 |
| 2.6 RT-PCR的反应条件 | 第35-36页 |
| 2.7 RT-qPCR的反应条件 | 第36-37页 |
| 2.8 肠道病毒71型重组酶聚合酶扩增技术检测方法的评价 | 第37-39页 |
| 2.8.1 灵敏度评价 | 第37-38页 |
| 2.8.2 特异度评价 | 第38页 |
| 2.8.3 临床应用的初步评价 | 第38-39页 |
| 第三章 实验结果 | 第39-44页 |
| 3.1 筛选出的引物和探针 | 第39-40页 |
| 3.2 灵敏度分析 | 第40-41页 |
| 3.3 特异度分析 | 第41页 |
| 3.4 临床应用初步评价 | 第41-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-49页 |
| 4.1 引物和探针的设计 | 第45页 |
| 4.2 特异度和灵敏度的分析 | 第45-46页 |
| 4.3 临床应用的初步评价 | 第46-47页 |
| 4.4 与RT-LAMP比较 | 第47页 |
| 4.5 本实验的不足 | 第47页 |
| 4.6 展望 | 第47-49页 |
| 全文小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 攻读学位期间成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |