| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| 1.1 MHC Ⅰ类分子的研究进展 | 第15-29页 |
| 1.1.1 MHC分子的发现 | 第15页 |
| 1.1.2 MHC Ⅰ类分子的功能 | 第15-19页 |
| 1.1.3 病原和肿瘤逃逸MHC Ⅰ类分子递呈抗原策略 | 第19-22页 |
| 1.1.4 MHC Ⅰ类分子的结构 | 第22-23页 |
| 1.1.5 基于MHC技术检测抗原应答T细胞的研究进展 | 第23-27页 |
| 1.1.6 猫MHC Ⅰ类分子的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.1.7 FIV的基因组结构和分子特征 | 第28-29页 |
| 1.1.8 CD8分子的结构 | 第29页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第29-30页 |
| 1.3 研究内容和技术路线 | 第30-31页 |
| 1.4 研究目标 | 第31-32页 |
| 第二章 FLA Ⅰ多态性分析 | 第32-47页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料 | 第32-33页 |
| 2.2.1 猫 | 第32页 |
| 2.2.2 载体及菌株 | 第32页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第32页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2.5 常用溶液及试剂的配制 | 第33页 |
| 2.3 方法 | 第33-38页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.3.2 猫外周血淋巴细胞的分离 | 第34页 |
| 2.3.3 总RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.3.4 FLA Ⅰ基因克隆 | 第35-38页 |
| 2.3.5 软件及公式 | 第38页 |
| 2.4 结果 | 第38-45页 |
| 2.4.1 FLA Ⅰ基因扩增与鉴定 | 第38页 |
| 2.4.2 FLA Ⅰ基因序列的测定及分析 | 第38-42页 |
| 2.4.3 FLA Ⅰ等位基因系统进化树分析 | 第42-43页 |
| 2.4.4 FLA Ⅰ α1、α2和α3各区变异分析 | 第43-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45页 |
| 2.5.1 FLA Ⅰ的克隆及其分子特征 | 第45页 |
| 2.5.2 FLA Ⅰα1、α2和α3区氨基酸变异频率的分析 | 第45页 |
| 2.5.3 高变异位点对FLA Ⅰ多肽递呈规律的影响 | 第45页 |
| 2.6 小结 | 第45-47页 |
| 第三章 pFLA Ⅰ递呈抗原多肽功能机制研究 | 第47-83页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 材料 | 第47-54页 |
| 3.2.1 载体与菌株 | 第47-48页 |
| 3.2.2 引物设计与合成 | 第48页 |
| 3.2.3 多肽的预测与合成 | 第48-50页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第50页 |
| 3.2.5 仪器设备 | 第50-51页 |
| 3.2.6 常用溶液及配制 | 第51-54页 |
| 3.3 方法 | 第54-62页 |
| 3.3.1 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)表达载体的构建 | 第54-58页 |
| 3.3.2 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)分子的表达 | 第58-59页 |
| 3.3.3 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)包涵体的提取 | 第59页 |
| 3.3.4 FLA-E~*01801_(-63E/N)或FLA-E~*01801_(-167W/S)、fβ2m及多肽的体外共复性与纯化 | 第59-60页 |
| 3.3.5 FLA-E~*01801_(-167W/SRMA-PlD)蛋白结晶 | 第60-62页 |
| 3.3.6 FLA-E~*01801_(-RMA)和FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)结构分析 | 第62页 |
| 3.4 结果 | 第62-81页 |
| 3.4.1 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)胞外区成熟肽表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 3.4.2 FLA-E~*01801_(-63E/N)、FLA-E~*0180_(167W/S)、fβ2m蛋白表达 | 第63页 |
| 3.4.3 FLA-E~*01801_(-167W/s-RMA-PlD)体外复性结果 | 第63-64页 |
| 3.4.4 FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)复合物蛋白的结晶、数据收集及结构解析 | 第64-66页 |
| 3.4.5 FLA-E~*01801_(-RMA9)和FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)蛋白晶体结构分析 | 第66-81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-82页 |
| 3.5.1 A口袋的限制性 | 第81页 |
| 3.5.2 A口袋限制性因素的分析 | 第81-82页 |
| 3.5.3 FIV的抗原肽谱 | 第82页 |
| 3.6 小结 | 第82-83页 |
| 第四章 pFLA Ⅰ结合基序的鉴定 | 第83-89页 |
| 4.1 引言 | 第83页 |
| 4.2 材料 | 第83页 |
| 4.2.1 随机肽的合成 | 第83页 |
| 4.2.2 FLA-E~*01801、fβ2m蛋白/分子生物学试剂/菌株/仪器 | 第83页 |
| 4.3 方法 | 第83-85页 |
| 4.3.1 FLA-E~*01801、fβ2m及随机多肽的体外复性及纯化 | 第83页 |
| 4.3.2 随机多肽的处理 | 第83-84页 |
| 4.3.3 色谱分离前样本处理 | 第84页 |
| 4.3.4 LC-MS/MS检测 | 第84页 |
| 4.3.5 高效液相色谱分离 | 第84页 |
| 4.3.6 质谱分析 | 第84-85页 |
| 4.3.7 多肽统计 | 第85页 |
| 4.4 结果 | 第85-88页 |
| 4.4.1 FLA-E~*01801/fβ2m/随机多肽的体外复性结果 | 第85-86页 |
| 4.4.2 LC-MS/MS TIC和Base Peak谱图分析 | 第86-87页 |
| 4.4.3 De Novo数据解析 | 第87页 |
| 4.4.4 随机多肽谱图质量分析 | 第87页 |
| 4.4.5 结合FLA-E~*01801的九肽每一位氨基酸的偏好性分析 | 第87-88页 |
| 4.5 讨论 | 第88页 |
| 4.6 小结 | 第88-89页 |
| 第五章 家猫CD8αα晶体结构研究 | 第89-101页 |
| 5.1 引言 | 第89页 |
| 5.2 材料 | 第89-91页 |
| 5.2.1 设计引物 | 第89-90页 |
| 5.2.2 合成编码猫CD8α链胞外区IgSF结构域的基因序列 | 第90-91页 |
| 5.2.3 菌株及载体 | 第91页 |
| 5.2.4 分子生物学试剂及仪器 | 第91页 |
| 5.3 方法 | 第91页 |
| 5.4 结果 | 第91-100页 |
| 5.4.1 fCD8α蛋白表达 | 第91页 |
| 5.4.2 fCD8αα蛋白的复性及纯化 | 第91-92页 |
| 5.4.3 fCD8αα蛋白的结晶条件及晶体外观 | 第92页 |
| 5.4.4 fCD8αα蛋白晶体衍射数据的收集 | 第92-93页 |
| 5.4.5 fCD8αα蛋白晶体结构解析 | 第93-94页 |
| 5.4.6 fCD8αα晶体结构分析 | 第94-100页 |
| 5.5 讨论 | 第100页 |
| 5.5.1 fCD8αα分子的结构特点 | 第100页 |
| 5.5.2 fCD8αα的CDR1 loop具有刚性特征 | 第100页 |
| 5.6 小结 | 第100-101页 |
| 第六章 结论 | 第101-102页 |
| 第七章 创新点 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 个人简历 | 第119-120页 |
